【摘要】：目的:研究質(zhì)子泵抑制劑(PPI)處理不同時(shí)間大鼠空腸細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)和組成的改變,探討抑制胃酸與腸道感染發(fā)生之間的潛在聯(lián)系。方法:以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,對(duì)照組不給藥(0 d),實(shí)驗(yàn)組連續(xù)腹腔注射奧美拉唑第5、9、14、21和28天,每天2次,每次10 mg/kg。研究結(jié)束次日處死動(dòng)物,收集空腸內(nèi)容物,提取DNA,PCR擴(kuò)增16S rRNA基因V3區(qū),行變性梯度凝膠電泳(DGGE),切膠測(cè)序確定細(xì)菌種屬,并分析其相對(duì)豐度變化。結(jié)果:與正常對(duì)照比,短期PPI處理(第5和9天)菌群變化相對(duì)較小,菌群相似度分別為(74.8±3.0)%和(70.9±7.5)%,肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、化糖梭狀芽胞桿菌(Clostridium saccharolyticum)和格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)相對(duì)豐度增加,共生菌羅伊乳桿菌(Lactobacillus reuteri)和柯林魏斯菌(Weissella koreensis)明顯減少。隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng),菌群變化程度加劇。第14天后,條件致病菌糞腸球菌(Enterococcus faecalis)過(guò)度增長(zhǎng),并取代羅伊乳桿菌成為最優(yōu)勢(shì)細(xì)菌。第21天致病菌難辨梭狀芽胞桿菌(Clostridium difficile)在大鼠空腸出現(xiàn)和定植;至第28天菌群組成變化最大,與0 d比相似度僅約(56.1±16.7)%。結(jié)論:短期給予PPI處理可誘導(dǎo)大鼠空腸菌群改變,但變化較小。長(zhǎng)期胃酸抑制(14 d)可導(dǎo)致空腸菌群失衡,致病菌豐度增加,可能為腸道細(xì)菌感染形成的關(guān)鍵誘因。
【圖文】：

奨±s表示，組間差異比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，兩兩比較用Bonferroni＇smultiplecomparison檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1PPI處理誘導(dǎo)大鼠胃液pH值應(yīng)用幽門結(jié)扎法收集胃液測(cè)定pH值，結(jié)果PPI處理第5、9、14、21和28天，胃液pH分別為4．86±0．46、4．95±0．52、5．01±0．34、4．90±0．50和5．05±0．46，，均顯著高于正常對(duì)照組(1．95±0．46，P＜0．01)。2．2PPI處理空腸菌群結(jié)構(gòu)改變應(yīng)用Quantity-One軟件對(duì)空腸菌群DGGE譜圖進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)給藥后空腸菌群結(jié)構(gòu)明顯改變，見圖1。可見兩個(gè)明顯的聚類簇(cluster)，第0、5和9天聚在一起，第14、21和28天分布在另一簇。相似度分析顯示，與0d比，PPI處理第5、9、14、21和28天分別為(74．8±3．0)%、(70．9±7．5)%、(63．3±6．8)%、(66．3±7．2)%和(56．1±16．7)%。通過(guò)PCA分析進(jìn)一步確定了PPI處理對(duì)空腸菌群結(jié)構(gòu)的影響，見圖2。每個(gè)圓點(diǎn)代表單一樣本菌群，任兩個(gè)圓點(diǎn)之間的直線距離表示樣本菌群組成的差異，距離越大，差異越大。我們發(fā)現(xiàn)，PPI處理第5和第9天樣本與0d較為接近，而第14、21和28天距離則相對(duì)較遠(yuǎn)，表明隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)菌群組成差異增加，與聚類分析結(jié)果一致。圖1空腸菌群DGGE譜圖聚類分析Figure1ClusteringdendrogrambasedontheDGGEprofilesofthejejunalmicrobiota圖2空腸菌群結(jié)構(gòu)主成分分析Figure2Principalcomponentanalysisplotgeneratedfromthemolecularfingerprintingofthejejunalmicrobiota·48·腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)2017年1月第24卷第1期Parenteral＆EnteralNutrition，Vol．24，No．1，January，2017

5．01±0．34、4．90±0．50和5．05±0．46，均顯著高于正常對(duì)照組(1．95±0．46，P＜0．01)。2．2PPI處理空腸菌群結(jié)構(gòu)改變應(yīng)用Quantity-One軟件對(duì)空腸菌群DGGE譜圖進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)給藥后空腸菌群結(jié)構(gòu)明顯改變，見圖1�？梢妰蓚�(gè)明顯的聚類簇(cluster)，第0、5和9天聚在一起，第14、21和28天分布在另一簇。相似度分析顯示，與0d比，PPI處理第5、9、14、21和28天分別為(74．8±3．0)%、(70．9±7．5)%、(63．3±6．8)%、(66．3±7．2)%和(56．1±16．7)%。通過(guò)PCA分析進(jìn)一步確定了PPI處理對(duì)空腸菌群結(jié)構(gòu)的影響，見圖2。每個(gè)圓點(diǎn)代表單一樣本菌群，任兩個(gè)圓點(diǎn)之間的直線距離表示樣本菌群組成的差異，距離越大，差異越大。我們發(fā)現(xiàn)，PPI處理第5和第9天樣本與0d較為接近，而第14、21和28天距離則相對(duì)較遠(yuǎn)，表明隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)菌群組成差異增加，與聚類分析結(jié)果一致。圖1空腸菌群DGGE譜圖聚類分析Figure1ClusteringdendrogrambasedontheDGGEprofilesofthejejunalmicrobiota圖2空腸菌群結(jié)構(gòu)主成分分析Figure2Principalcomponentanalysisplotgeneratedfromthemolecularfingerprintingofthejejunalmicrobiota·48·腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)2017年1月第24卷第1期Parenteral＆EnteralNutrition，Vol．24，No．1，January，2017
【作者單位】： 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院(南京軍區(qū)南京總醫(yī)院)解放軍普通外科研究所;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)項(xiàng)目(2013CB531403)
【分類號(hào)】：R975

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號(hào)：2539573