【摘要】：目的：研究蒙脫石散、美沙拉秦及美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散對TNBS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性UC大鼠腸上皮細(xì)胞凋亡和增殖的影響,探討兩種藥物治療或聯(lián)合治療對實(shí)驗(yàn)性UC大鼠受損傷腸粘膜的修復(fù)作用及其機(jī)制。 方法：將82只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、蒙脫石散組、美沙拉秦組、美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組,正常組10只,其余各組每組18只。除正常組大鼠外,其他組通過TNBS/乙醇法建立實(shí)驗(yàn)性UC大鼠模型。造模24小時(shí)后隨機(jī)抽取兩只大鼠解剖,觀察結(jié)腸組織病理變化,并另隨機(jī)抽取8只大鼠注射99TcmN核諾氟沙星氨荒酸鹽配合物(99TcmN(NFXDTC)2),行SPECT全身顯像,來明確炎癥存在和確認(rèn)模型的建立。模型建立成功后,按大鼠體表面積折算藥量,每日灌服相應(yīng)劑量生理鹽水、美沙拉秦、蒙脫石散、美沙拉秦間隔兩小時(shí)后蒙脫石散。于治療滿5天后處死一半大鼠,剩余大鼠治療滿12天后全部處死,收集大鼠的結(jié)腸標(biāo)本。采用TUNEL法測定細(xì)胞凋亡率,采用免疫組織化學(xué)方法檢測VEGF、PCNA表達(dá)陽性細(xì)胞率,采用熒光定量PCR檢測腸組織中VEGF和PCNA兩個(gè)基因表達(dá)情況。 結(jié)果：1.模型建立成功：造模滿24小時(shí)后大鼠出現(xiàn)腹瀉、血便、體重下降。結(jié)腸組織行HE染色觀察可見粘膜缺血、壞死,潰瘍形成面積大,粘膜下層水腫,伴有中性粒細(xì)胞浸潤,肌層亦有散在中性粒細(xì)胞。腺體結(jié)構(gòu)破壞,杯狀細(xì)胞減少。SPECT顯像示腸道炎癥存在。2.腸組織細(xì)胞凋亡的檢測結(jié)果：治療5天及12天的模型組和三個(gè)干預(yù)組與正常組相比,腸上皮細(xì)胞凋亡率明顯增加(P=0.000)；給藥治療5天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療5天的模型組比較,腸上皮細(xì)胞凋亡率明顯降低(P=0.000)；三組干預(yù)組間兩兩比較,美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組的凋亡率明顯低于蒙脫石散組和美沙拉秦組(P=0.000),但蒙脫石散組與美沙拉秦組相比(P=0.347)；給藥治療12天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療12天的模型組比較,腸上皮細(xì)胞凋亡率明顯降低(P=0.000)；三組干預(yù)組間兩兩比較,美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組的凋亡率明顯低于美沙拉秦組,美沙拉秦組明顯低于蒙脫石散組(P=0.000)；各干預(yù)組治療12天的凋亡率與本組治療5天的凋亡率相比明顯減少(P=0.000)。3.免疫組化檢測腸組織PCN及、EGF表達(dá)的檢測結(jié)果：①PCNA：治療5天及12天的模型組與正常組相比,腸組織中PCNA明顯降低(P=0.000)；治療5天及12天的四個(gè)干預(yù)組與正常組相比,治療5天及12天美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組腸組織中PCNA的陽性表達(dá)與正常組比較(5天P=0.222,12天P=0.133)；治療5天及12天的蒙脫石散組和美沙拉秦組與正常組相比(P0.05)；給藥治療5天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療5天的模型組比較,腸組織中PCNA的陽性表達(dá)率明顯升高(P=0.000)；三組干預(yù)組間兩兩比較,治療5天的各干預(yù)組比較(P0.05)；給藥治療12天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療12天的模型組比較,腸組織中PCNA的陽性表達(dá)率明顯升高(P=0.000)；三組干預(yù)組間兩兩比較,治療12天的各干預(yù)組比較(P0.05)；蒙脫石散組治療12天的PCNA陽性表達(dá)率與本組治療5天的PCNA陽性表達(dá)率相比明顯增加(P=0.044),美沙拉秦及美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組治療5天與治療12天PCNA的陽性表達(dá)率比較無差異(P0.05)。②VEGF:治療5天及12天的模型組與正常組相比,腸組織中VEGF明顯增高(P=0.000)；治療5天及12天的四個(gè)干預(yù)組與正常組相比,治療5天及12天美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組腸組織中VEGF的陽性表達(dá)率與正常組比較(5天P=0.739,12天P=0.746)；治療5天及12天的蒙脫石散組和美沙拉秦組與正常組相比(P0.05)；給藥治療5天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療5天的模型組比較,腸組織中VEGF的陽性表達(dá)率明顯降低(P=0.000)；三組干預(yù)組間兩兩比較,美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組的VEGF陽性表達(dá)率明顯低于美沙拉秦組,美沙拉秦組明顯低于蒙脫石散組(P=0.000)；給藥治療12天的三個(gè)干預(yù)組分別與治療12天的模型組比較,腸組織中VEGF陽性表達(dá)率明顯降低(P0.05)；三組干預(yù)組間兩兩比較,美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組的VEGF陽性表達(dá)率明顯低于美沙拉秦組,美沙拉秦組明顯低于蒙脫石散組(P0.05)；蒙脫石散組治療12天的VEGF陽性表達(dá)率與本組治療5天的VEGF陽性表達(dá)率相比明顯降低(P=0.006),美沙拉秦及美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組治療5天與治療12天VEGF陽性表達(dá)率比較(P0.05)。4.熒光定量PCR檢測腸組織中VEGF和PCNA基因表達(dá)的檢測結(jié)果：①PCNA：模型組與正常組相比,腸組織中PCNA明顯降低(P=0.047)；正常組與蒙脫石散組、美沙拉秦組、美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組相比(P0.05)；三個(gè)干預(yù)組分別與模型組相比(P0.05)；三組干預(yù)組間兩兩比較(P0.05)：②VEGF:模型組與正常組相比,腸組織中VEGF明顯增高(P=0.002)；正常組與蒙脫石散組、美沙拉秦組、美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組相比(P0.05)；三個(gè)干預(yù)組分別與模型組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；三組干預(yù)組間兩兩比較,蒙脫石散組與美沙拉秦組VEGF相比(P=0.556)；蒙脫石散組及美沙拉秦組與美沙拉秦聯(lián)合蒙脫石散組相比(P0.05)。 結(jié)論：1.通過光鏡下觀察結(jié)腸病理變化及SPECT顯像證實(shí)TNBS/乙醇法可以建立經(jīng)典實(shí)驗(yàn)性UC大鼠模型。2.實(shí)驗(yàn)表明腸上皮細(xì)胞凋亡參與了UC的發(fā)病過程,蒙脫石散與美沙拉秦聯(lián)合治療能抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖,蒙脫石散能輔助美沙拉秦降低腸粘膜及血管通透性,效果優(yōu)于單獨(dú)使用美沙拉秦。3.本實(shí)驗(yàn)中,單獨(dú)藥物或聯(lián)合藥物治療12天的效果均優(yōu)于治療5天的效果。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2523910