發(fā)布時間：2019-08-01 06:38

【摘要】：目的:酪氨酸激酶由于在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),并且與腫瘤的生長、增殖、轉(zhuǎn)移緊密聯(lián)系,近年來作為腫瘤治療的一個非常重要的藥物靶點被廣泛研究。酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)是以受體酪氨酸激酶為靶點的藥物,具有選擇性較高、療效較好、不良反應(yīng)比較少等特點,尤其是對基因突變的敏感性患者,TKIs治療顯示了很好的臨床療效。TKIs之一吉非替尼,主要適用于治療以往接受過化學(xué)治療,轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的患者,或者不適于化療的局部晚期腫瘤的患者。這些腫瘤患者中有些同時患有高血壓,高血脂等疾病,服用厄貝沙坦或辛伐他汀等降血壓,降血脂的藥物。厄貝沙坦和辛伐他汀可能會與吉非替尼在體內(nèi)發(fā)生相互作用,產(chǎn)生藥代動力學(xué)的影響。因此,本試驗將建立快速、高效、準(zhǔn)確的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(Liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)測定酪氨酸酶抑制劑吉非替尼血藥濃度,并通過藥代動力學(xué)方法評價厄貝沙坦和辛伐他汀對吉非替尼體內(nèi)代謝的影響,旨在為臨床合理用藥提供參考。方法:1 LC-MS/MS法測定吉非替尼血漿藥物濃度1.1色譜與質(zhì)譜條件色譜柱:Gemini C18(50×2.0 mm,5μm);柱溫:40℃;自動進(jìn)樣器溫度:4℃;流動相:0.05%NH3·H20(A)-乙腈(B);流速:0.5ml·min-1;梯度洗脫條件:0.01-1 min,5%B;1-1.5 min,5%-95%B;1.5-2.5 min,95%B;2.5-3 min,95%-5%B;4 min,5%B。離子源:ESI;離子監(jiān)測方式:MRM;離子極性:正離子;CUR:25 kPa;CAD:8 kPa;離子源噴霧電壓:5500v;離子源溫度:500℃;EP:10 V;CXP:6 V;GS1:50 kPa;GS2:50kPa;吉非替尼離子對:446.9/128.0 m/z,CE:30 V,DP:80 V;內(nèi)標(biāo)厄洛替尼離子對:394.2/277.9 m/z,CE:37 V,DP:113 V。1.2血漿樣品的處理精密取空白血漿90μl,加不同稀釋濃度吉非替尼標(biāo)準(zhǔn)溶液10μl,加內(nèi)標(biāo)厄洛替尼(1μg/ml)10μl,渦旋20s,加乙腈500μl,渦旋3min,離心(15000g·min-1)5min,精密取上清50μl加入450μl水,渦旋1min,離心(15000g·min-1)3min,進(jìn)樣,建立吉非替尼血藥濃度測定方法。2實驗動物分組及給藥SD大鼠30只,按體重隨機(jī)分為3組,對照組(吉非替尼單藥組)、實驗組a(吉非替尼+厄貝沙坦組)、實驗組b(吉非替尼+辛伐他汀組),給藥劑量吉非替尼片為50mg/kg,厄貝沙坦片為15mg/kg,辛伐他汀片為2mg/kg,在給藥后在0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、48、72h時間點于大鼠眼內(nèi)眥取血。3比較厄貝沙坦和辛伐他汀分別對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響用das3.0軟件處理吉非替尼血藥濃度,得到給藥后大鼠非房室模型的藥代參數(shù),用spss20.0軟件處理非房室模型的藥代參數(shù),并比較厄貝沙坦和辛伐他汀分別對吉非替尼藥代動力學(xué)參數(shù)的影響。結(jié)果:1lc-ms/ms法測定吉非替尼血漿藥物濃度方法學(xué)結(jié)果顯示所選方法專屬性高,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定,標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=0.00543x+0.00548,r=0.9943,最低定量限為5ng/ml,最低定量限精密度的rSD%小于20%,質(zhì)控樣品的日內(nèi)精密度和日間精密度rSD均小于15%,最低定量限和質(zhì)控樣品的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi),室溫4h、血漿處理后自動進(jìn)樣器12h、反復(fù)凍融三次、低溫冰箱-70℃長期放置、稀釋10倍,20倍穩(wěn)定性的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi),基質(zhì)效應(yīng)、樣品回收率均符合《中國藥典》生物樣本分析指導(dǎo)原則的要求。2采用das3.0軟件處理吉非替尼血藥濃度,采用統(tǒng)計學(xué)方法評價厄貝沙坦和辛伐他汀對吉非替尼藥代動力學(xué)的影響。實驗組a:(吉非替尼+厄貝沙坦)給藥組的非房室模型參數(shù)auc(0-t)、auc(0-∞)、cmax、tmax、t1/2、vd、cl、mrt(0-t)、mrt(0-∞)、c_last與對照組(吉非替尼單藥組)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。實驗組b:(吉非替尼+辛伐他汀)給藥組的非房室模型參數(shù)auc(0-t)、auc(0-∞)、cmax、tmax、t1/2、mrt(0-t)、mrt(0-∞)、c_last、tmax、mrt(0-t)與對照組(吉非替尼單藥組)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。而vd和cl與對照組(吉非替尼單藥組)比較具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1本實驗建立的LC-MS/MS法測定吉非替尼血藥濃度的方法,具有準(zhǔn)確、高效、簡便的特點,方法學(xué)考察結(jié)果均符合生物樣品分析的質(zhì)量控制要求。2本實驗通過比較聯(lián)用厄貝沙坦組和辛伐他汀組與吉非替尼單藥組的藥代參數(shù),結(jié)果顯示,厄貝沙坦對大鼠體內(nèi)吉非替尼的藥代動力學(xué)參數(shù)沒有發(fā)現(xiàn)有顯著影響,辛伐他汀顯著影響大鼠體內(nèi)吉非替尼的Vd和CL,而對其他藥代動力學(xué)參數(shù)無影響。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2521584