【摘要】：目的:從血漿冷沉淀中采用離子交換層析法純化人凝血因子Ⅷ。方法:冰凍血漿在2~8℃環(huán)境下融化,離心法收獲冷沉淀。用注射用水溶解冷沉淀,探索了5種冷沉淀溶解液預純化的方法。冷沉淀溶解液經(jīng)S/D病毒滅活后采用離子交換層析純化人凝血因子Ⅷ,經(jīng)超濾、配制、除菌分裝、凍干、干熱病毒滅活,獲得人凝血因子Ⅷ成品,分別檢測流穿液、洗滌液和洗脫液中人凝血因子Ⅷ效價和蛋白含量。觀察了凍干和不同干熱條件前后凝血因子Ⅷ活性的變化。觀察人凝血因子Ⅷ凍干品的外觀和復溶時間。結果:冷沉淀中人凝血因子Ⅷ的回收率為40%~70%。5種冷沉淀溶解液預純化方法中,用鹽酸調節(jié)p H至6.6、6.3的方法人凝血因子Ⅷ回收率較高。離子交換層析流穿液中FⅧ損失率小于5%,而洗滌液中FⅧ損失率較高,最高損失率超過20%。人凝血因子Ⅷ中蛋白質含量較低,均小于0.65 mg·m L-1,比活性為50~100IU·m L-1。吐溫-80和TNBP的殘留量均符合《中國藥典》的要求。凍干過程中人凝血因子Ⅷ效價下降大約1%~5%。100℃,30 min干熱處理對FⅧ效價的破壞小于80℃,72 h。人凝血因子Ⅷ凍干品外觀和復溶時間均達到中國藥典標準。結論:采用離子交換層析法從血漿冷沉淀中分離出高純度人凝血因子Ⅷ,可以進行工藝放大研究。
[Abstract]:Objective: to purify human coagulation factor VIII from plasma cold precipitation by ion exchange chromatography. Methods: frozen plasma melted at 2 鈩，

本文編號：2489807