發(fā)布時間：2019-05-19 18:25

【摘要】：海洋真菌作為海洋微生物的重要組成部分,其遺傳背景復(fù)雜,次生代謝產(chǎn)物具有化學(xué)多樣性豐富、產(chǎn)量高等特點,在藥物先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)、石油降解及海洋環(huán)境的修復(fù)等方面發(fā)揮著重要作用。近年來由于對隨著對陸生微生物天然產(chǎn)物研究的深入,由于化合物的重復(fù)分離,從陸生微生物中尋找尋找新的活性天然產(chǎn)物的難度越來越大。所以,天然產(chǎn)物學(xué)家們把他們的目光集中到海洋微生物上,特別是海洋真菌,由于其的生存的特殊環(huán)境,被認為是新的活性天然產(chǎn)物的重要源泉。在這個前提下以及作為我們前期海洋真菌活性天然產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)工作的延續(xù),我們采用化學(xué)和生物學(xué)相結(jié)合的方法,開展對海洋真菌活性次生代謝產(chǎn)物的研究工作。具體內(nèi)容包括：菌株的分離與純化；真菌菌株的篩選及“天才”真菌的獲得；目標真菌的發(fā)酵條件摸索；真菌發(fā)酵、提取及化合物分離；單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定；單體化合物活性的初步評價及構(gòu)效關(guān)系的分析。本論文對15個海洋來源樣品進行了微生物的分離,最終分離得到90株真菌和46株放線菌。通過TLC. HPLC指紋圖譜和HPLC-MS的化學(xué)篩選結(jié)合抗腫瘤、抗菌、抗病毒及糖苷酶抑制活性等活性篩選,最終分離篩選到4株海洋“天才”真菌,對其發(fā)酵條件進行了系統(tǒng)的摸索后進行大規(guī)模的發(fā)酵提取,然后對其次生代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和活性進行了深入研究。綜合采用薄層色譜、硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和半制備高效液相等色譜法從菌株莖點屬真菌Phoma sp. OUCMDZ-1847中共分離得到18個化合物(1-18),其中包括3個新的硫代二酮哌嗪類化合物(1-3)、10個已知的硫代二酮哌嗪類化合物(4-13)、兩個簡單的二酮哌嗪類化合物(14-15)、一個苯的衍生物(16)、一個吲哚衍生物(17)和一個嘌呤類化合物(18)。從曲霉屬真菌Aspergillus sp.OUCMDZ-1583中分離得到23個化合物(19-41),包括1 8個新化合物(19-36)和5個己知的化合物(37-41)。從菌株OUCMDZ-1635中分離得到3個新的化合物(42-44),包括一個以一對互變異構(gòu)體存在的生物堿類化合物(42)、一個倍半萜類化合物(43)和一個甾體類化合物(44)。從菌株OUCMDZ-1857中分離得到2個己知的生物堿類化合物(45,46)。通過核磁共振譜(NMR)、質(zhì)譜(MS)、紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、圓二色譜(CD)等現(xiàn)代波譜和光譜學(xué)方法結(jié)合X-射線單晶衍射和化學(xué)溝通反應(yīng)等方法確定了化合物的平面結(jié)構(gòu)以及絕對構(gòu)型。最后,運用體外生物活性篩選模型,采用生物活性評價方法評價了所獲得的單體化合物的抗腫瘤、抗流感病毒H1N1、抗菌和α糖苷酶抑制活性。結(jié)果表明：結(jié)果顯示化合物2,4,5,11和12對HL-60, HCT-116, A549, K562和MGC-803五株腫瘤細胞株的顯示有較好的腫瘤細胞毒活性�；衔�19,20,23,28,29,32-36,和39-41具有一定的糖苷酶抑制活性,IC50分別是2.36,1.65,1.30,2.37,2.70,1.36,1.54,2.21,2.26,0.027,1.65,1.19和1.74 mM,陽性藥阿卡波糖的IC50為0.95mM。另外,化合物36和39具有一定的抗H1N1病毒活性,IC50分別為172.4/μM和175.5μM,陽性藥利巴韋林的IC50為137.3μM。綜上,本文對4株海洋真菌的次生代謝產(chǎn)物進行了系統(tǒng)研究,共分離鑒定了46個化合物,包括24個新的化合物,并對這些化合物的活性進行了系統(tǒng)的評價,其中5個硫代二酮哌嗪類化合物具有較強的細胞毒活性,13個化合物具有一定的糖苷酶活性,2個化合物具有抗病毒活性。
[Abstract]:As an important part of marine microorganisms, marine fungi play an important role in the discovery of the drug-leading compound, the oil degradation and the repair of the marine environment. In recent years, because of the in-depth study of the natural products of the terrestrial micro-organisms, the difficulty of finding new active natural products from the terrestrial microorganisms is becoming more and more difficult due to the repeated separation of the compounds. As a result, natural product scientists focus their attention on marine microorganisms, particularly marine fungi, which are considered to be an important source of new active natural products due to their special environment. In this premise and as a continuation of the discovery of the natural products of marine fungal activity in our early stage, we use a combination of chemical and biological methods to carry out research on the secondary metabolites of marine fungi. The specific content includes the isolation and purification of the strain, the screening of the fungus strain and the obtaining of the "genius" fungus, the fermentation condition of the target fungus, the fungus fermentation, the extraction and the compound separation, and the structural identification of the monomer compound; The preliminary evaluation of the activity of the monomer compound and the analysis of the structure-effect relationship. In this paper,15 marine-derived samples were isolated and 90 fungus and 46 actinomycetes were isolated. By tlc. the HPLC fingerprint and the chemical screening of the HPLC-MS are combined with the activity screening of the anti-tumor, the antibacterial, the anti-virus and the glycosidase inhibitory activity, and finally the 4 strains of marine "genius" fungi are separated and screened, and the fermentation conditions are carried out for large-scale fermentation and extraction, The structure and activity of the secondary metabolites were further studied. The fungi, Phoma sp., were isolated by thin-layer chromatography, silica gel column chromatography, gel column chromatography and semi-preparative high performance liquid chromatography. A total of 18 compounds (1-18) are obtained from the total of OCMDZ-1847, which comprises 3 new thiodione-like compounds (1-3),10 known thiodiketone-like compounds (4-13), two simple diketone-like compounds (14-15), and a benzene derivative (16), And a terin derivative (17) and a methotrexate compound (18). 23 compounds (19-41), including 1 8 new compounds (19-36) and 5 well-known compounds (37-41), were isolated from Aspergillus sp. OCMDZ-1583 of the genus Aspergillus. Three new compounds (42-44) are isolated from the strain OCMDZ-1635, and include an alkaloid compound (42), a polysemide compound (43) and a donor compound (44) present in a pair of tautomers. Two known alkaloid compounds (45,46) were isolated from the strain OCMDZ-1857. The planar structure and the absolute configuration of the compound were determined by means of NMR, MS, UV, IR, CD and other methods such as X-ray single crystal diffraction and chemical communication. Finally, an in vitro biological activity screening model was used to evaluate the anti-tumor of the obtained monomer compound, the anti-influenza virus (H1N1), the anti-bacterial and the anti-glycogenase-inhibiting activity by the method of biological activity evaluation. The results showed that the results showed that the compounds 2,4,5,11 and 12 had good cytotoxic activity on the tumor cell lines of HL-60, HCT-116, A549, K562 and MGC-803. Compounds 19,20,23,28,29,32-36, and 39-41 had a certain glycosidase inhibitory activity with an IC50 of 2.36, 1.65, 1.30, 2.37, 2.70, 1.36, 1.54, 2.21, 2.26, 0.027, 1.65, 1.19, and 1.74 mM, with an IC50 of 0.95 mM for the positive drug acarbose. In addition, compounds 36 and 39 have a certain anti-H1N1 virus activity, IC50 of 172.4/. mu.M and 175.mu. M, respectively, and the IC50 of the positive drug ribavirin is 137.3. m Including 24 new compounds and a systematic evaluation of the activity of these compounds,5 of which have strong cytotoxic activity,13 compounds have a certain glycosidase activity and 2 compounds have anti-viral activity.
【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R915

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本文編號：2480961