發(fā)布時(shí)間：2019-01-04 12:50

【摘要】：建立PARP-1的體外活性測(cè)定方法并對(duì)84個(gè)具有潛在PARP抑制活性的化合物進(jìn)行篩選。從Sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞中提取酶液,以NAD+為底物,DNA為激活劑,建立PARP-1的活性測(cè)定方法;以高通量技術(shù)參數(shù)評(píng)價(jià)此方法,用已知PARP抑制劑進(jìn)行驗(yàn)證,并以此方法進(jìn)行PARP抑制劑的篩選。結(jié)果顯示,確定的酶促反應(yīng)體系為:12.5 nmol/L NAD+,15μg/m L DNA,6.25×10-4U PARP-1。評(píng)價(jià)Z'因子為0.76,S/B值為3.58�；诖四Ｐ秃Y出47個(gè)化合物在濃度7.4μmol/L時(shí)對(duì)PARP-1的抑制率達(dá)到60%以上。表明所建立的PARP-1活性測(cè)定方法,適用于PARP-1抑制劑的高通量篩選。
[Abstract]:To establish an in vitro assay for the activity of PARP-1 and to screen 84 compounds with potential PARP inhibitory activity. A method for determining the activity of Sf9 was established by extracting enzyme from Sf9 insect cells and using NAD as substrate and DNA as activator. The method was evaluated with high throughput technical parameters and verified by known PARP inhibitors. The method was used to screen PARP inhibitors. The results showed that the enzymatic reaction system was 12. 5 nmol/L NAD, 15 渭 g / mL DNA,6.25 脳 10 ~ (-4) U PARP-1.. The Z' factor was 0.76% S / B = 3.58. On the basis of this model, 47 compounds were found to have a inhibitory rate of over 60% on PARP-1 at the concentration of 7.4 渭 mol/L. The results showed that the established method for the determination of PARP-1 activity was suitable for high throughput screening of PARP-1 inhibitors.
【作者單位】： 江南大學(xué)藥學(xué)院;
【分類(lèi)號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2400316