發(fā)布時(shí)間：2018-12-26 08:20

【摘要】：目的研究鹽酸法舒地爾(FH)對(duì)大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪損傷(OGD)的保護(hù)作用。方法傳代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞與無(wú)糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制備OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞存活;比色法檢測(cè)乳酸脫氫酶(LDH);乙炔基脫氧尿苷(Ed U)摻入法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)熒光雙染觀察細(xì)胞凋亡;2,7-二氯氫化熒光素(DHCF-DA)熒光染色和硝基四氮唑藍(lán)(NBT)還原實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平。結(jié)果與正常對(duì)照組比較,OGD模型組星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率為(24±6)%,下降了4倍(P0.01);OGD模型組LDH釋放量顯著升高至(366±7)U·L-1(P0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的預(yù)處理組,細(xì)胞存活率分別上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH釋放分別下降至290±18和(268±20)U·L-1(P0.01),細(xì)胞Ed U陽(yáng)性率由OGD模型組的(47±6)%,分別下降到(35±6)%和(29±5)%(P0.01)。Hoechst染色及AO/EB雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)顯示,FH能顯著減少OGD損傷后細(xì)胞的凋亡及壞死,使晚期凋亡細(xì)胞比例減少(P0.05);DCFH-DA熒光和NBT還原實(shí)驗(yàn)顯示,FH降低OGD損傷后ROS水平,且FH10μmol·L-1的預(yù)處理組降低的幅度比5μmol·L-1的預(yù)處理組更明顯,但兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論FH對(duì)傳代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞OGD具有保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平有關(guān)。
[Abstract]:Objective to study the protective effect of fasudil hydrochloride (FH) on (OGD) injury induced by oxygen glucose deprivation in rat cortical astrocytes. Methods cultured rat cortical astrocytes were incubated with glycos-free Na2S2O42 mmol L-1 for 4 h to prepare OGD model. FH 5 and 10 渭 mol L-1 were added at 2 h before OGD. The cell survival was detected by thiazolyl (MTT) assay, and the DNA synthesis of astrocytes was detected by colorimetric assay for lactate dehydrogenase (LDH); acetyldeoxyuridine (Ed U) incorporation. Hoechst staining and acridine orange (AO) / ethidium bromide (EB) fluorescence double staining were used to observe the apoptosis of the cells, and the levels of reactive oxygen (ROS) in the cells were detected by 2C7-dichlorofluorescein (DHCF-DA) fluorescence staining and (NBT) reduction assay of nitro tetrazolium blue. Results compared with the control group, the survival rate of astrocytes in the OGD model group was (24 鹵6)%, which decreased by 4 times (P0.01); OGD model group) significantly increased the LDH release to (366 鹵7) U L-1 (P0.01). The cell survival rate increased to (42 鹵5)% and (43 鹵5)%, and the LDH release decreased to (290 鹵18) and (268 鹵20) U L-1 (P0.01) in the pretreatment group with FH 5 and 10 渭 mol L-1, respectively. The positive rate of Ed U decreased from (47 鹵6)% in the OGD model group to (35 鹵6)% and (29 鹵5)% in the OGD model group (P0.01). Hoechst staining and AO/EB double staining respectively). The results showed that FH could significantly reduce the apoptosis and necrosis of the cells after OGD injury. The proportion of late apoptotic cells was decreased (P0.05). DCFH-DA fluorescence and NBT reduction experiments showed that FH decreased the level of ROS after OGD injury, and the reduction of ROS level in FH10 渭 mol L-1 preconditioning group was more significant than that in 5 渭 mol L-1 preconditioning group, but there was no significant difference between the two groups. Conclusion FH has protective effect on OGD of cultured rat cortical astrocytes, and its mechanism may be related to the reduction of intracellular ROS level.
【作者單位】： 長(zhǎng)江航運(yùn)總醫(yī)院武漢腦科醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系;
【基金】：交通運(yùn)輸部長(zhǎng)江航務(wù)管理局課題(201210011) 武漢市衛(wèi)計(jì)委臨床醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(WX14D12)~~
【分類號(hào)】：R965

【共引文獻(xiàn)】

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3 王U，

本文編號(hào)：2391807