【摘要】：[目的]構建人源胱硫醚β合酶CBS△516-525體外高通量篩選模型,在基礎酶活水平,篩選天然產(chǎn)物庫,發(fā)現(xiàn)新型、高效且特異的CBS天然產(chǎn)物抑制劑。[方法]在192串聯(lián)雙孔板內(nèi),構建純酶CBS△516-525的高通量篩選模型,以200!mol/L初篩5 206個天然產(chǎn)物,經(jīng)50!mol/L和5!mol/L復測驗證后,選擇抑制效果好的新型抑制劑進行劑量依賴性測試并檢測其對同源酶胱硫醚γ裂解酶(CSE)的抑制效果。[結果]原核表達純化出具有生物活性的CBS△516-525酶,經(jīng)高通量篩選發(fā)現(xiàn)2個IC50約1!mol/L的CBS天然產(chǎn)物抑制劑,且對同源酶CSE均有180倍選擇性。[結論]在基礎酶活條件下,高通量篩選發(fā)現(xiàn)了選擇性大于180倍的CBS高效天然產(chǎn)物抑制劑,這可為CBS的分子機制和功能研究提供特異的分子工具。
[Abstract]:[objective] to construct a high throughput screening model of human cystathionine 尾 synthase CBS 516-525 in vitro, and to screen the natural product library at the basic enzyme activity level, and to find a novel, efficient and specific inhibitor of CBS natural product. [methods] A high throughput screening model of pure enzyme CBS 516-525 was constructed in a 192 tandem double-hole plate. 5206 natural products were screened with 200g mol / L, and the results were verified by repeated measurements of 50 mol / L and 5 mol / L, respectively. A new inhibitor with good inhibitory effect was selected for dose-dependent test and its inhibitory effect on homologous cystathithione 緯 lyase (CSE) was tested. [results] the CBS 516-525 enzyme with biological activity was purified from prokaryotic expression. Two CBS natural product inhibitors of about 1 mol / L of IC50 were identified by high throughput screening, and the homologous enzyme CSE was 180 times more selective. [conclusion] under the basic enzyme activity condition, the high throughput screening has found the CBS high efficiency natural product inhibitor whose selectivity is more than 180 times, which can provide the special molecular tool for the study of the molecular mechanism and function of CBS.
【作者單位】： 上海交通大學系統(tǒng)生物醫(yī)學教育部重點實驗室系統(tǒng)生物醫(yī)學研究院
【基金】：國家自然科學基金-青年科學基金項目(“靶向胱硫醚γ裂解酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)及作用機制研究”,No.31500635)
【分類號】：R965.1

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4 Ed Silverman 編譯 儲e，

本文編號：2383352