【摘要】：目的通過(guò)升高眼內(nèi)壓法建立兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷（retinal ischemia-reperfusion injury RIRI）模型，耳緣靜脈給予奧扎格雷鈉，利用HE染色，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)視網(wǎng)膜Caspase-3及Bcl-2表達(dá)的變化以及TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡的表達(dá)，探討奧扎格雷鈉對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及對(duì)Caspase-3及Bcl-2表達(dá)的影響，為臨床中視網(wǎng)膜缺血性損傷提供理論依據(jù)。 方法選用健康雄性日本純種大耳白兔78只，體重2.0～2.5kg，隨機(jī)分3組：正常組（6只），單純?nèi)毖俟嘧⒔M（IR36只），奧扎格雷鈉注射治療組（36只）。后兩組又分為6h、12h、24h、48h、72h、120h組（每組6只）。正常組，不做任何處理；IR組通過(guò)升壓裝置提高前房眼壓制備缺血再灌注模型，不再給予其他措施；（奧扎格雷鈉+IR）治療組在缺血再灌注損傷后立即耳緣靜脈注射奧扎格雷鈉，25mg/kg，1次/d。正常組和損傷組注射等劑量的平衡鹽溶液。各組分別于再灌注后6h、12h、24h、48h、72h、120h經(jīng)耳緣靜脈注射空氣10ml栓塞處死家兔，立即摘取缺血再灌注的眼球。對(duì)不同時(shí)間段的視網(wǎng)膜組織分別通過(guò)HE染色法觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化，通過(guò)免疫組化法檢測(cè)凋亡基因Caspase-3、Bcl-2蛋白表達(dá)的變化和通過(guò)TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化，所得結(jié)果進(jìn)行圖像分析，將數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果1HE染色視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化：正常組視網(wǎng)膜組織層次清晰，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈單層密集排列，細(xì)胞體積較大。IR組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目較正常組減少，隨時(shí)間推遲視網(wǎng)膜水腫加劇，各層細(xì)胞排列稍疏松，空泡樣變，再灌注72h視網(wǎng)膜水腫減輕，節(jié)細(xì)胞數(shù)目減少，120h視網(wǎng)膜水腫消失，但整個(gè)視網(wǎng)膜變薄。奧扎格雷鈉注射治療組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)減少程度、各層細(xì)胞損害程度均較IR組有所減輕。2免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Caspase-3、Bcl-2蛋白表達(dá)的變化：正常組中沒(méi)有Caspase-3、Bcl-2蛋白陽(yáng)性細(xì)胞，再灌注6h后陽(yáng)性表達(dá)增多，主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；再灌注12h時(shí)表達(dá)增多；再灌注24h陽(yáng)性表達(dá)至高峰，主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，內(nèi)核層也有少量表達(dá)，外核層未見(jiàn)表達(dá)；再灌注48h后陽(yáng)性表達(dá)逐漸下降，主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；再灌注72h時(shí)可見(jiàn)少量表達(dá)；至再灌注120h視網(wǎng)膜基本無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。治療組各觀察指標(biāo)變化趨勢(shì)基本與損傷組相似。相同時(shí)間點(diǎn)治療組與損傷組比較，Bcl-2表達(dá)明顯增強(qiáng)（除120h組），Caspase-3表達(dá)明顯減弱（P＜0.05）。損傷組內(nèi)與治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)之間陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)差異顯著（P＜0.01）。3TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化：正常組中沒(méi)有凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)，再灌注6h凋亡細(xì)胞出現(xiàn)少量表達(dá)，12h凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)明顯增多；24h凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)達(dá)到高峰，主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層與內(nèi)核層；48h凋亡細(xì)胞表達(dá)開(kāi)始下降，72h凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)明顯減少；120h未見(jiàn)明顯表達(dá)。治療組凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)趨勢(shì)基本同損傷組，但表達(dá)量明顯減少。損傷組與治療組間同一時(shí)間點(diǎn)比較，12h、24h、48h、72h組凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），6h、120h組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。損傷組內(nèi)與治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)之間凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)差異顯著（P＜0.01）。 結(jié)論奧扎格雷鈉對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞具有明顯的保護(hù)作用，其可通過(guò)下調(diào)Caspase-3蛋白及增加Bcl-2蛋白的表達(dá)，，從而達(dá)到抑制RIRI時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2373138