發(fā)布時(shí)間：2018-12-11 14:11

【摘要】：研究背景：腫瘤血管生成與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)�？寡苌芍委煶蔀槎喾N實(shí)體腫瘤治療中的有效方案。富勒醇C60(OH)22是一種低細(xì)胞毒性納米材料，體內(nèi)研究顯示其具有抗腫瘤作用，機(jī)制包括免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤血管生成等，但它抗血管生成的作用機(jī)制尚不明確。既往研究顯示C60衍生物可以調(diào)控HDAC，而HDAC抑制劑通過下調(diào)HIF-1α、VEGF的表達(dá)從而抑制腫瘤血管生成。本課題進(jìn)一步研究C60(OH)22是否通過調(diào)控HDAC而影響血管生成。 方法：通過檢測細(xì)胞活性（MTT法）來反映C60(OH)22對永生化人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增殖的影響。通過細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell法）和網(wǎng)格形成實(shí)驗(yàn)來檢測C60(OH)22對體外HUVEC血管生成的影響。通過檢測C60(OH)22處理后細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）以及HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF、RECK的表達(dá)和MMP2、MMP9酶活性的變化，并進(jìn)一步通過干擾HDAC1或HDAC2的表達(dá)后檢測體外HUVEC介導(dǎo)的血管生成、細(xì)胞內(nèi)ROS以及HIF-1α、VEGF、、RECK表達(dá)和MMP2、MMP9酶活性的變化，來研究C60(OH)22對血管生成的作用機(jī)制。通過裸鼠的Matrigel plug模型，進(jìn)一步研究C60(OH)22對體內(nèi)血管生成及對HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、RECK表達(dá)水平的影響。 結(jié)果： C60(OH)22能夠抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和網(wǎng)格形成，但不影響細(xì)胞活性。C60(OH)22能夠降低細(xì)胞內(nèi)ROS以及HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF的表達(dá)，并抑制MMP2、MMP9酶活性，但增加了RECK的表達(dá)。siRNA干擾HDAC1或HDAC2的表達(dá)，抑制了血管內(nèi)皮細(xì)胞侵襲和網(wǎng)格形成，降低了細(xì)胞內(nèi)ROS水平以及HIF-1α、VEGF的表達(dá)，并抑制了MMP2、MMP9酶活性，但增加了RECK的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示C60(OH)22處理后Matrigel plug中血管數(shù)明顯減少，，HDAC1、HDAC2、HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9的表達(dá)水平降低，RECK的表達(dá)水平增加。 結(jié)論：C60(OH)22通過抑制HDAC1和HDAC2的表達(dá)從而抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成。
[Abstract]:Background: tumor angiogenesis is closely related to tumor growth and metastasis. Anti-angiogenic therapy has become an effective regimen in the treatment of various solid tumors. Fullerenol C60 (OH) 22 is a low cytotoxic nano-material. In vivo studies show that C60 (OH) 22 has anti-tumor effects, including immunomodulation and anti-tumor angiogenesis, but its mechanism of anti-angiogenesis is unclear. Previous studies have shown that C60 derivatives can regulate HDAC, and HDAC inhibitors inhibit tumor angiogenesis by down-regulating the expression of HIF-1 偽 and VEGF. In this study, we further studied whether C 60 (OH) 22 affects angiogenesis by regulating HDAC. Methods: the effect of C60 (OH) 22 on (HUVEC) proliferation of human umbilical vein endothelial cells was measured by MTT assay. The effect of C60 (OH) 22 on HUVEC angiogenesis in vitro was detected by cell invasion assay (Transwell) and grid formation assay. After treatment with C60 (OH) 22, the expression of reactive oxygen (ROS), HDAC1,HDAC2,HIF-1 偽, VEGF,RECK and the activity of MMP2,MMP9 were detected. Furthermore, HUVEC mediated angiogenesis in vitro was detected by interfering with the expression of HDAC1 or HDAC2. The changes of ROS, HIF-1 偽, VEGF,,RECK expression and MMP2,MMP9 enzyme activity were used to study the mechanism of C60 (OH) 22 on angiogenesis. The effects of C60 (OH) 22 on angiogenesis and the expression of HDAC1,HDAC2,HIF-1 偽 and VEGF,MMP2,MMP9,RECK in nude mice were further studied by using Matrigel plug model of nude mice. Results: C60 (OH) 22 inhibited the invasion, metastasis and mesh formation of vascular endothelial cells, but did not affect cell activity. C60 (OH) 22 decreased the expression of ROS and HDAC1,HDAC2,HIF-1 偽, VEGF, and inhibited the activity of MMP2,MMP9 enzyme. SiRNA interfered with the expression of HDAC1 or HDAC2, inhibited the invasion and mesh formation of vascular endothelial cells, decreased the expression of ROS, HIF-1 偽 and VEGF, and inhibited the activity of MMP2,MMP9, but increased the expression of RECK. In vivo experiments showed that the number of blood vessels decreased, the expression of HDAC1,HDAC2,HIF-1 偽 and VEGF,MMP2,MMP9 decreased, and the expression of RECK increased after C60 (OH) 22 treatment. Conclusion: C60 (OH) 22 inhibits angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells by inhibiting the expression of HDAC1 and HDAC2.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

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本文編號：2372692