發(fā)布時間：2018-11-16 20:55

【摘要】：目的： 通過建立Lewis肺癌細(xì)胞皮下移植瘤小鼠動物模型,研究厄洛替尼按晝夜不同時辰點給藥的抗腫瘤作用及毒副作用,并從表皮生長因子(EGFR)-蛋白激酶B(PKB/AKT)-細(xì)胞周期蛋白(CyclinD1)-周期素依賴性激酶4(CDK-4)通路探討其可能作用機(jī)制。 方法： 1.實驗?zāi)Ｐ徒⑴c分組：建立Lewis肺癌細(xì)胞皮下移植瘤小鼠動物模型,隨機(jī)將荷瘤小鼠分為模型組、低劑量組(15mg·kg-1)、中劑量組(30mg·kg-1)、高劑量組(60mg·kg-1),每組隨機(jī)分為8：00、12：00、16：00、20：00、24：00、04：00六個時辰點組,空白對照組不種瘤。 2.給藥：厄洛替尼各組分別在對應(yīng)的六個時辰點口服灌胃給予相對應(yīng)劑量厄洛替尼0.2m1,模型組和空白對照組給予同樣體積的羧甲基纖維素鈉溶液和蒸餾水。 3.藥效學(xué)指標(biāo)檢測：觀察小鼠生活質(zhì)量,每天測小鼠體重,每隔3天測小鼠腫瘤體積,繪制瘤體的生長曲線。第21天取血后斷頸處死小鼠,剝離腫瘤,稱瘤重,計算抑瘤率；血常規(guī)檢測白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅蛋白等的變化。 4.相關(guān)基因表達(dá)：用實時熒光定量PCR (Quantificational Real Time-PCR)檢測不同時辰點小鼠腫瘤組織中EGFR、AKT1、 AKT2、CDK-4和CyclinD1mRNA的表達(dá)水平。 5.相關(guān)蛋白表達(dá)：蛋白質(zhì)印跡法檢測不同時辰點給藥后腫瘤組織中蛋白AKT、P-AKT、CyclinDl的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1.厄洛替尼低中高劑量組的腫瘤生長較模型組均有明顯抑制(P0.05),中劑量組和高劑量組較低劑量組腫瘤生長緩慢(P0.05),中高劑量組之間無顯著性差異。 2.不同時辰點比較,厄洛替尼組腫瘤生長明期(8：00、12：00、16：00)較暗期(20：00、24：00、04：00)明顯減慢(P0.05)；16：00組生長最慢(P0.05)。 3.與空白對照組比較,模型組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計數(shù)明顯升高(P0.05),血紅蛋白明顯降低(P0.05)；與模型組比,24：00、04：00組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞明顯升高(P0.05),16：00、20：00組血紅蛋白降低明顯(P0.05)。 4.與模型組比較,用藥組8：00、12：00、16：00、20：00、04：00各組瘤重明顯減輕(P0.05),其中16：00組抑瘤效果最好(P0.05)。 5.模型組腫瘤細(xì)胞排列正常,幾乎沒有觀察到細(xì)胞死亡；厄洛替尼給藥組8：00、12：00、16：00、20：00出現(xiàn)大面積壞死、炎細(xì)胞浸潤和出血,24：00、04：00組出現(xiàn)小面積壞死和少量炎細(xì)胞浸潤。 6.與模型組比較,8：00、12：00、16：00組EGFR基因表達(dá)相對量降低(P0.05),各組之間表達(dá)無顯著性差異(P0.05),8：00、12：00、16：00、20：00組AKT1基因表達(dá)相對量降低(P0.05),16：00組降低幅度最大(P0.05)；CDK-4基因表達(dá)各組無顯著性差異(P0.05),8：00、12：00、16：00、20：00組CycllinD1基因表達(dá)相對量降低(P0.05),各組之間表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。 7.與模型組比較,AKT蛋白各時辰點表達(dá)量無顯著性差異；P-AKT蛋白表達(dá)在12：00和16：00明顯降低(P0.05);CyclinD蛋白表達(dá)在8：00、12：00、16：00和04：00明顯降低(P0.05)。結(jié)論： 厄洛替尼對小鼠非小細(xì)胞肺癌皮下移植瘤有明顯的抑制作用,且其療效和毒副作用呈現(xiàn)晝夜節(jié)律變化,其作用機(jī)制可能與EGFR-AKT-CyclinD1-CDK-4通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2336626