【摘要】：目的：本文旨在探討奧氮平（olanzapine）的抗膠質瘤作用及其可能的作用機制。 方法：體外實驗選用膠質瘤T98和LN229細胞。MTT法檢測不同濃度的奧氮平（0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mΜ），作用不同時間后對兩個膠質瘤細胞株的增殖的影響。Western blot檢測自噬相關蛋白LC3、p62和凋亡相關蛋白Bcl-2的變化，免疫熒光檢測自噬熒光顆粒的形成與分布情況。Hoechst33258染色以及AnnexinV-FITC/PI實驗檢測不同濃度奧氮平處理后，兩個細胞凋亡的情況。MTT和集落形成實驗分析自噬抑制劑3MA對奧氮平抑瘤作用的影響。LN229細胞建立裸鼠皮下移植瘤模型，口服給以奧氮平，繪制腫瘤體積生長曲線，觀察奧氮平抑制腫瘤生長的作用。Western blot檢測腫瘤組織中自噬相關蛋白LC3、p62和凋亡相關蛋白Bcl-2的表達的情況。免疫組化分析法分析各組移植瘤中增殖指數Ki-67和凋亡相關蛋白caspase-3的表達情況。 結果：MTT結果顯示，奧氮平對兩株膠質瘤細胞LN229和T98均有抑制作用，且呈劑量依賴性和時間依賴性。LC3、p62的蛋白表達情況以及免疫熒光檢測LC3的顆粒形成與分布情況都顯示奧氮平能夠在這兩株細胞中誘導自噬。Western blot分析Bcl-2蛋白表達、Hoechst33258染色實驗以及V-FITC/PI染色實驗表明，奧氮平能夠促進LN229和T98細胞凋亡。MTT和集落形成實驗表明，自噬抑制劑3MA減弱了奧氮平對這兩株細胞的增殖抑制作用。裸鼠皮下移植瘤體積曲線說明，奧氮平能夠在體內抑制膠質瘤的生長。Western blot分析移植瘤的Bcl-2蛋白表達，顯示奧氮平能夠促進移植瘤凋亡；LC3和p62蛋白表達顯示，，高劑量奧氮平在體內皮下移植瘤中誘導自噬。免疫組化分析移植瘤組織中Ki-67和caspase-3陽性表達結果顯示，奧氮平抑制裸鼠皮下移植瘤的增殖并且促進其凋亡。 結論：奧氮平在體外、體內都能夠抑制膠質瘤的生長。其抗膠質瘤作用的機制與自噬誘導相關。自噬的誘導促進了膠質瘤細胞的死亡。
[Abstract]:Objective: to investigate the anti-glioma effect of olanzapine (olanzapine) and its possible mechanism. Methods: glioma T98 and LN229 cells were used in vitro. Different concentrations of olanzapine were detected by MTT method. The proliferation of two glioma cell lines was detected by. Western blot after exposure to different concentrations of olanzapine (0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 6 and 0. 8 渭 m). Western blot was used to detect the changes of autophagy associated protein LC3,p62 and apoptosis-related protein Bcl-2. Immunofluorescence was used to detect the formation and distribution of autophagy particles. Hoechst33258 staining and AnnexinV-FITC/PI assay were used to detect the formation and distribution of autophagy particles treated with different concentrations of olanzapine. The effect of autophagy inhibitor 3MA on antitumor effects of autolytic inhibitor 3MA. LN229 cells were used to establish subcutaneous transplanted tumor model of nude mice and were given olanzapine orally to draw tumor volume growth curve. To observe the inhibitory effect of olanzapine on tumor growth,. Western blot was used to detect the expression of autophagy associated protein (LC3,p62) and apoptosis-related protein (Bcl-2) in tumor tissues. The expression of proliferative index (Ki-67) and apoptosis-related protein (caspase-3) were analyzed by immunohistochemistry. Results: the results of MTT showed that olanzapine could inhibit both LN229 and T98 glioma cells. The protein expression of LC3,p62 and the particle formation and distribution of LC3 detected by immunofluorescence showed that olanzapine could induce autophagy. Western blot to analyze Bcl-2 protein expression and Hoechst33258 staining in these two cell lines. Color experiments and V-FITC/PI staining experiments show that, Olanzapine could promote apoptosis of LN229 and T98 cells. MTT and colony formation assay showed that autophagy inhibitor 3MA could attenuate the inhibitory effect of olanzapine on the proliferation of LN229 and T98 cells. The volume curve of subcutaneous transplanted tumor in nude mice showed that olanzapine could inhibit the growth of glioma in vivo. Western blot analysis showed that olanzapine could promote the apoptosis of transplanted tumor, and the expression of LC3 and p62 protein showed that the expression of olanzapine could promote the apoptosis of transplanted tumor. High-dose olanzapine induces autophagy in vivo subcutaneously transplanted tumor. Immunohistochemical analysis showed that olanzapine inhibited the proliferation and promoted the apoptosis of xenografts in nude mice. Conclusion: olanzapine can inhibit the growth of glioma in vitro. The mechanism of its anti-glioma action is related to autophagy induction. Autophagy induces the death of glioma cells.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【共引文獻】

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本文編號：2283508