發(fā)布時(shí)間：2018-06-27 07:11

  本文選題：肝素粗品 + 種屬　； 參考：《藥物生物技術(shù)》2016年06期

【摘要】：研究了基于熒光定量PCR方法的肝素粗品種屬來(lái)源質(zhì)控方法,用于肝素藥品生產(chǎn)企業(yè)的原料驗(yàn)收質(zhì)量控制。該方法采用實(shí)時(shí)定量PCR法,針對(duì)豬、牛、綿羊、山羊基因組特有的基因序列設(shè)計(jì)引物與探針,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行擴(kuò)增,利用擴(kuò)增曲線的Ct值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過(guò)未知樣品的Ct值對(duì)未知樣品初始模板中的基因進(jìn)行定量。測(cè)定時(shí)通過(guò)肝素酶處理肝素原料,以消除肝素介導(dǎo)的PCR抑制效應(yīng)。結(jié)果:該方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下具有較好的專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度和耐用性:豬基因在30~0.06 ng/μL范圍內(nèi)呈良好線性,牛、綿羊、山羊基因在0.6~0.000 3 ng/μL范圍內(nèi)呈良好線性;豬基因的定量限為0.001 ng/μL,牛、綿羊、山羊基因的定量限為0.000 3 ng/μL。本質(zhì)控方法較基因組純化試劑盒提純方法具有保證被檢基因的真實(shí)性、原始性、完整性等優(yōu)點(diǎn)。
[Abstract]:The quality control method of crude heparin species based on fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR) was studied, which was applied to the quality control of raw material acceptance in heparin drug manufacturers. In this method, real-time quantitative PCR was used to design primers and probes for gene sequences specific to the genomes of pigs, cattle, sheep and goats. Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify the target gene, and the standard curve was drawn by Ct value of the amplification curve. The genes in the initial template of unknown samples were quantified by the Ct values of unknown samples. Heparinase was used to treat heparin in order to eliminate the effect of heparin-mediated PCR. Results: this method has good specificity, accuracy, precision and durability in our laboratory. The linearity of pig gene is good in the range of 30 ~ 0.06 ng/ 渭 L, and that of cattle, sheep and goat gene is good in the range of 0.6 ~ 0.000 3 ng/ 渭 L; The quantitative limit of porcine gene was 0.001 ng/ 渭 L, and that of cattle, sheep and goat gene was 0.000 3 ng/ 渭 L. The method of essence control has the advantages of ensuring the authenticity, originality and integrality of the tested gene compared with the method of genomic purification kit.
【作者單位】： 常州千紅生化制藥股份有限公司;
【分類(lèi)號(hào)】：R440

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