本文選題：乳糖 + 半乳糖��； 參考：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的1.本研究嘗試制備一種新型含有乳糖或半乳糖的兼具M(jìn)R診斷、抗腫瘤藥物智能釋放、肝臟主動(dòng)靶向等多功能聚合物納米診療膠束,PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox,并表征其理化性質(zhì)。2.通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究診療膠束細(xì)胞攝取機(jī)制,探討其對腫瘤細(xì)胞(HepG2)的殺傷力,檢測診療膠束對肝癌細(xì)胞的靶向性。通過體外MRI顯像,證明所制備的膠束能夠新型多功能影像對比劑。研究方法首先以十二醇為引發(fā)劑,通過己內(nèi)酯(ε-CL)的開環(huán)聚合反應(yīng)制備出疏水性聚合物:聚己內(nèi)酯(PCL);然后經(jīng)過兩步化學(xué)反應(yīng)將PCL的端羥基轉(zhuǎn)化成含有二硫鍵鏈接的氨基(PCL-ss-NH2);后以PCL-ss-NH2為大分子引發(fā)劑,引發(fā)疊氮化谷氨酸酯環(huán)內(nèi)酸酐(AELG-NCA)單體聚合成功制備出含二硫鍵的嵌段聚合物PCL-SS-PAELG;最后,通過“Click”反應(yīng),將炔基化乳糖Lactose、炔基化半乳糖Galactose偶聯(lián)到所合成的共聚物,形成PCL_(37)-SS-PGluLac10和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)。所得糖基化聚合物具有兩親性行為,在水溶液中可通過自組裝行為成納米膠束�；谠擃愄腔抖尉酆衔锏膬捎H性行為,可通過透析法將疏水性超順磁性氧化鐵(SPIO)、抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)包載于其疏水內(nèi)核中,制成腫瘤診療一體化納米膠束PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox。通過~1HNMR和FTIR對PCL_(37)-SS-PGluLac10和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)進(jìn)行表征;分別用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)及透射電鏡(TEM)測定膠束的表面形貌、粒徑及粒徑分布;采用芘熒光法檢測臨界膠束濃度;通過含熒光染料標(biāo)記的植物凝集素特異性識別實(shí)驗(yàn)檢測診療膠束的生物活性;并對阿霉素及SPIO的包載率、診療膠束體外藥物還原響應(yīng)智能釋放行為進(jìn)行研究。用MTT法評價(jià)含糖基化藥物膠束PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox以及PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox的腫瘤細(xì)胞殺傷力。選用的細(xì)胞為人肝癌細(xì)胞(HepG2)。設(shè)置由低到高六個(gè)濃度梯度值,在酶標(biāo)儀上測得每孔的吸光度值(OD值)計(jì)算細(xì)胞存活率。通過Dox熒光觀察、DAPI染核以及流式細(xì)胞術(shù)來分析細(xì)胞對診療膠束的攝取及分布情況。采用半乳糖抑制性實(shí)驗(yàn)檢測含糖診療膠束的肝靶向性。通過體外MRI顯像檢測膠束的T2對比效果。研究結(jié)果1.~1HNMR和FTIR結(jié)果證實(shí)PCL_(37)-SS-PGluLac10和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)制備成功。DLS測得所制備的診療膠束PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox平均粒徑為(120.8±1.7)nm,PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox平均粒徑為(150.1±2.6)nm;TEM下觀察所得到的膠束呈均一的球狀結(jié)構(gòu)。2.芘熒光法測得PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)的CMC值為0.0105 mg/mL,PCL_(37)-SS-PGluLac10的CMC值為0.0166 mg/mL。植物凝集素特異性結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明糖聚肽可以特異性結(jié)合凝集素。Dox釋放實(shí)驗(yàn)表明,在含有GSH的情況下,兩種膠束都能快速釋放藥物,12h釋放量分別達(dá)到了58.6%和70%;在24h Dox幾乎完全釋放。3.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果:空白未載藥膠束PCL_(37)-SS-PGluLac10和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)與肝癌(HepG2)細(xì)胞共孵育48h后,MTT法測得的細(xì)胞生存率均維持在80%以上,而載藥膠束PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox與肝癌(HepG2)細(xì)胞共孵育48h后發(fā)現(xiàn):細(xì)胞生存率與藥物濃度成反比關(guān)系,隨著藥物Dox濃度的提高,細(xì)胞生長抑制作用越顯著。4.熒光觀察、DAPI染核分析結(jié)果顯示:兩種糖基化納米診療膠束均可以較快被細(xì)胞攝取并且主要進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi),Free Dox主要進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)。半乳糖競爭性抑制實(shí)驗(yàn)證明了含糖膠束對肝癌細(xì)胞的主動(dòng)靶向性。5.體外MRI成像結(jié)果顯示:隨著Fe離子濃度的逐漸增加,PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox兩種膠束MR T2WI信號逐漸減低;其對應(yīng)T2弛豫率分別為:168.1 Fe mM-1·s-1、259.4 Fe mM-1s-1,明顯優(yōu)于Feridex?(111.5 Fe m M-1 s-1)。證明了其優(yōu)良的T2對比效果。結(jié)論1.本研究成功制備了一種新型含有乳糖或半乳糖的兼具M(jìn)R診斷、抗腫瘤藥物智能釋放、肝主動(dòng)靶向性等多功能的兩親性聚合物納米診療膠束,PCL_(37)-SS-PGluLac10@SPIO/Dox和PCL_(37)-SS-PGluGal_(10)@SPIO/Dox。2.制備的兩種含糖診療膠束粒徑小,大小均一,具有良好的水溶性、膠體穩(wěn)定性、生物相容性、抗腫瘤效應(yīng)以及MR顯像等多種功能于一體,具有一定的潛在應(yīng)用前景。
[Abstract]:A novel multifunctional image contrast agent ( PCL _ ( 37 ) - SS - PGluten @ SPIO / Dox and PCL _ ( 37 ) - SS - PGluGal 10 @ SPIO / Dox and PCL _ ( 37 ) - SS - PGlutar10@SPIO / Dox and PCL _ ( 37 ) - SS - PGluGal _ ( 10 ) were prepared .
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R943

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2071915