本文選題：多藥耐藥　切入點(diǎn)：多柔比星　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物產(chǎn)生多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)是腫瘤化療失敗的主要原因,也是困擾腫瘤治療的一大難題。藥物載體作為一種新型的MDR逆轉(zhuǎn)策略,具有多種優(yōu)勢(shì)而成為研究熱點(diǎn),前期多柔比星(Doxorubicin,DOX)脂質(zhì)體已被證明可部分克服腫瘤多藥耐藥。而從植物五味子提取的五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)已被證明具有抑制P-gp和促進(jìn)凋亡作用。目的:本論文試制多柔比星-五味子乙素共載脂質(zhì)體(Doxorubicin-Schisandrin B co-liposomes,DSCL),探討五味子乙素與脂質(zhì)體對(duì)克服腫瘤MDR的協(xié)同作用。方法:探討其制劑的優(yōu)化、對(duì)多柔比星的細(xì)胞積聚、細(xì)胞攝取及細(xì)胞外排的影響,并分析該制劑克服腫瘤細(xì)胞MDR的可能機(jī)制,同時(shí)建立荷瘤耐藥小鼠以評(píng)價(jià)其藥效學(xué)。結(jié)果:首先采用硫酸銨梯度法制備DSCL,建立HPLC藥物濃度測(cè)定方法,分別通過藥物磷脂比和磷脂膽固醇比優(yōu)化制備方法,最終獲得多柔比星包封率為93.96±3.30%,五味子乙素包封率為87.81±1.97%,粒徑為163±102nm,Zeta電位為-23±4mv,體外體外釋放實(shí)驗(yàn)和體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)說明DSCL符合后續(xù)研究。然后,以人白血細(xì)胞系K562/DOX耐藥細(xì)胞為模型細(xì)胞,以多柔比星溶液(F-DOX)、五味子乙素+多柔比星混合液(SchB+DOX)、多柔比星脂質(zhì)體(DOX-L)、多柔比星脂質(zhì)體與五味子乙素混合液(DOX-L+Sch B)、維拉帕米+多柔比星混合液(Ver+DOX)為對(duì)照,分別比較DSCL組和對(duì)照組的細(xì)胞毒性不同,并測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入耐藥細(xì)胞的DOX藥物量差別,繪制藥物濃度隨時(shí)間變化曲線。結(jié)果顯示DSCL逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別是SchB+DOX組、DOX-L組和DOX-L+Sch B組的1.68、14.52和1.42倍。DSCL使DOX進(jìn)入耐藥細(xì)胞K562/DOX的藥物量是DOX-L、Sch B+DOX的1.30和1.21倍,且具有延緩?fù)馀抛饔�。說明DSCL具備良好的克服腫瘤多藥耐藥作用,脂質(zhì)體和五味子乙素顯示了良好的協(xié)同作用。為了進(jìn)一步了解DSCL克服腫瘤MDR機(jī)制,我們?cè)O(shè)計(jì)了內(nèi)吞抑制劑和低溫?cái)z取實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示K562/DOX細(xì)胞攝取DSCL主要通過耗能的內(nèi)吞途徑。而P-gp表達(dá)和凋亡實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 DSCL克服腫瘤MDR可能是通過抑制P-gp表達(dá)和促進(jìn)凋亡雙通道途徑。最后,運(yùn)用K562/DOX細(xì)胞嫁接法建立了荷瘤耐藥小鼠模型,測(cè)定其腫瘤體積和瘤重的結(jié)果表明,其抑制率高達(dá)84.14%,說明DSCL具備有效克服多藥耐藥特性,五味子乙素和脂質(zhì)體在克服MDR是具有良好的協(xié)同作用。結(jié)論:DSCL具備良好的克服MDR作用,脂質(zhì)體和五味子乙素顯示了良好的協(xié)同作用。
[Abstract]:Background: multidrug resistance (MDR) produced by tumor cells against tumor drugs is the main reason for the failure of chemotherapy and a difficult problem in tumor therapy. Drug vector is a new strategy of MDR reversal. Has a variety of advantages and has become a research hotspot, Doxorubicindox) liposomes have been shown to overcome multidrug resistance in some cases. Schisandrin B Sch B) extracted from Schisandrin B has been proved to be able to inhibit P-gp and promote apoptosis. The cocarrier liposome Doxorubicin-Schisandrin B co-liposome DSCL was used to study the synergistic effect of Schisandin-B and liposome on overcoming tumor MDR. The effects of doxorubicin on cell accumulation, cell uptake and extracellular efflux of doxorubicin were analyzed. The possible mechanism of the preparation in overcoming MDR in tumor cells was analyzed. Results: first, the ammonium sulfate gradient method was used to prepare DSCLs, and the method for the determination of drug concentration was established. The preparation methods were optimized by the ratio of phospholipid to phospholipid and the ratio of phospholipid to cholesterol, respectively. Finally, the entrapment efficiency of doxorubicin was 93.96 鹵3.30, the entrapment efficiency of Schisandrin was 87.81 鹵1.97, and the particle size was 163 鹵102 nm 路m ~ (-1) Zeta potential was -23 鹵4 MV. The results of in vitro release test and in vitro stability test showed that DSCL was suitable for further study. Human white blood cell line K562% DOX resistant cells were used as model cells. Compared with doxorubicin solution (F-DOXN), schisandrin doxorubicin (SchB DOXX), doxorubicin liposome (DOX-LX), doxorubicin liposome and schisandrin B (SchB), verapamitoxin (Verapamil) was used as control. The cytotoxicity of DSCL group was compared with that of control group, and the amount of DOX drug entering drug-resistant cells at different time points was measured. The results showed that the reversal times of DSCL were 1.68 ~ 14.52 and 1.42 times of those of SchB DOX group and DOX-L SchB group, respectively. The amount of drugs that DOX entered into resistant cell line K562% DOX was 1.30 and 1.21 times as much as that of DOX-LX Sch B DOX. DSCL has good effect of overcoming multidrug resistance, liposome and schisandrin showed good synergism. In order to further understand the mechanism of DSCL to overcome tumor MDR, DSCL has the function of delaying efflux. We designed endocytosis inhibitors and hypothermic uptake tests, The results showed that the uptake of DSCL by K562 / DOX cells was mainly through the energy-consuming endocytosis pathway. The results of P-gp expression and apoptosis experiments confirmed that DSCL could overcome tumor MDR by inhibiting P-gp expression and promoting apoptosis. A mouse model of drug resistance was established by K562% DOX cell grafting. The results of tumor volume and tumor weight test showed that the inhibition rate of DSCL was as high as 84.14, which indicated that DSCL had the ability to overcome multidrug resistance. Conclusion: Schisandrin and liposome have a good synergistic effect on overcoming MDR, and liposome and Schisandrin B have good synergistic effect on overcoming MDR.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1643654