本文選題：型大麻素受體　切入點：選擇性拮抗劑　出處：《國際藥學(xué)研究雜志》2015年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的 LMJ07為靶向大麻素Ⅰ型受體(CB1R)設(shè)計合成的選擇性拮抗劑,本文從分子水平受體結(jié)合、細胞水平CB1R受體內(nèi)在化、CB1R誘導(dǎo)的細胞骨架和信號分子的變化等方面對其CB1R拮抗活性進行了評價。方法以已知的CB1R選擇性拮抗劑利莫那班(SR141716A)為對照,采用放射性配體競爭結(jié)合和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)示蹤大麻素受體(CBR)內(nèi)在化的高內(nèi)涵分析實驗分析了LMJ07對2種CBR亞型(CB1R和CB2R)的結(jié)合及G蛋白不依賴的受體激活的拮抗活性及選擇性;分別采用CELLKEY無標(biāo)記檢測系統(tǒng)和均相時間分辨熒光(HTRF)測定了LMJ07對CBR激活誘導(dǎo)的CHO-CB1細胞骨架和胞內(nèi)環(huán)腺苷酸(c AMP)含量的影響;最后采用連續(xù)熒光檢測技術(shù)使用表達CB1R的原代海馬細胞檢測LMJ07對胞內(nèi)Ca2+的影響。結(jié)果 LMJ07高親和、高選擇地與CB1R結(jié)合,選擇性地拮抗CB1R的激活導(dǎo)致的受體內(nèi)吞,且選擇性和拮抗活性與利莫那班相當(dāng);在CHO-CB1R細胞上,LMJ07(0.01~10μmol/L)劑量依賴地逆轉(zhuǎn)CBR激動劑Win55212-2誘導(dǎo)的細胞骨架變化相關(guān)的細胞電阻改變、劑量依賴地逆轉(zhuǎn)Win55212-2降低胞內(nèi)c AMP含量效應(yīng);在原代培養(yǎng)的海馬細胞上,LMJ07(10 nmol/L~1μmol/L)可拮抗Win55212-2誘導(dǎo)的胞內(nèi)Ca2+增加效應(yīng)。在上述實驗中,LMJ07拮抗CB1R通路的信號分子和功能的活性與利莫那班相當(dāng)。結(jié)論 LMJ07是一個與利莫那班活性相當(dāng)?shù)男陆Y(jié)構(gòu)類型CB1R選擇性拮抗劑。
[Abstract]:The purpose of LMJ07 targeting cannabinoid receptors (CB1R) selective antagonist synthesis, this paper from the molecular level, cellular level of CB1R receptor binding, receptor internalization, cytoskeleton and signaling molecules in CB1R induced changes in other aspects of the evaluation of the antagonistic activity of CB1R. Methods CB1R selective antagonist rimonabant known (SR141716A) as control, using radioligand binding and enhanced green fluorescent protein (EGFP) tracer cannabinoid receptor (CBR) analysis of high content of internalized LMJ07 experimental analysis of 2 kinds of CBR subtypes (CB1R and CB2R) antagonistic activity and selective activation of G protein binding and receptor independent respectively; using CELLKEY marker detection system and homogeneous time-resolved fluorescence (HTRF) induced activation of LMJ07 cells and CHO-CB1 cells of the inner skeleton of adenylate CBR was determined (C AMP) content influence; finally, with the continuous Fluorescence detection technology using expression detection of primary hippocampal cell LMJ07 CB1R on intracellular Ca2+. Results LMJ07 high affinity, high selective binding to CB1R, the selective antagonist of CB1R receptor activation results in endocytosis, and selective antagonist activity and rimonabant and equivalent; in CHO-CB1R cells, LMJ07 (0.01~10 mol/L) cell resistance dose dependently reversed CBR agonist agent Win55212-2 induced changes of cytoskeleton related changes, dose dependently reversed Win55212-2 effect of intracellular AMP content decreased C; in primary cultured hippocampal cells, LMJ07 (10 nmol/L~1 mol/L) can antagonize Win55212-2 induced intracellular Ca2+ increase effect. In the experiment, activity and rimonabant LMJ07 signaling molecules of the CB1R pathway and antagonistic function. Conclusion LMJ07 is a new type of structure with a CB1R selective antagonist rimonabant activity equivalent.

【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所;沈陽藥科大學(xué);
【基金】：國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項資助項目(2012ZX09301003-001,2012ZX09301003-003) 國家自然科學(xué)基金資助項目(81102308)
【分類號】：R96

【共引文獻】

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本文編號：1623329