發(fā)布時(shí)間：2018-03-14 09:29

  本文選題：二氫卟吩e6　切入點(diǎn)：聲敏納米脂質(zhì)體　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：1目的聲敏納米脂質(zhì)體(Sound sensitive liposomes)是一種新型藥物載體,可以運(yùn)載藥物至特定組織及器官,并在局部超聲波刺激下釋放藥物,從而達(dá)到靶向快速釋藥的目的,進(jìn)一步提高靶向性及局部給藥濃度。高強(qiáng)度聚焦超聲(HIFU)是一種腫瘤熱療技術(shù),通過(guò)對(duì)腫瘤局部實(shí)施高強(qiáng)度的定位聚焦超聲而產(chǎn)生以瞬間高溫為主的多重殺傷效應(yīng),從而殺滅腫瘤細(xì)胞[1]。但由于HIFU的高度定位特性,使實(shí)體瘤周邊的腫瘤細(xì)胞無(wú)法有效殺傷。納米脂質(zhì)體顆粒還可作為HIFU增敏劑,能有效降低HIFU消融所需的強(qiáng)度閾值,并極大地增強(qiáng)腫瘤治療的效果[2]。磁性普通納米脂質(zhì)體作為一種磁導(dǎo)向新型藥物傳遞系統(tǒng),可利用外加磁場(chǎng)的引導(dǎo)來(lái)改變藥物在體內(nèi)的分布,提高其治療部位的藥物濃度,并降低其他非治療部位的藥物濃度,達(dá)到靶向治療的效果[3]。將二者聯(lián)合應(yīng)用于腫瘤的治療,可達(dá)到協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞的效果。本研究在前期工作基礎(chǔ)上[4],選擇聲敏劑二氫卟吩e6(Ce6)為藥物,采用蛋黃卵磷脂(EPC)與膽固醇作為聲敏脂質(zhì)體的膜材,通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)行處方工藝的優(yōu)化,同時(shí)加入油酸改性納米四氧化三鐵,制成Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體(聲敏脂質(zhì)體),進(jìn)行質(zhì)量檢查并評(píng)價(jià)其靶向性、聲敏特性及細(xì)胞毒性等相關(guān)指標(biāo),為進(jìn)一步采用微透析技術(shù)進(jìn)行腫瘤局部藥物動(dòng)力學(xué)及PK-PD結(jié)合模型研究提供劑型支持。2方法2.1運(yùn)用紫外分光光度法進(jìn)行Ce6的含量檢測(cè),并進(jìn)行方法學(xué)考察。2.2選擇適當(dāng)?shù)闹苽浞椒ê筒牧现苽浯判月暶糁|(zhì)體,并通過(guò)正交試驗(yàn),優(yōu)化處方工藝,對(duì)制備得到的Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體進(jìn)行包封率、載藥量、粒徑形態(tài)、磁靶向性和聲敏特性的評(píng)價(jià)。2.3由于Ce6對(duì)人肺腺癌和人乳腺癌具有較好的治療作用,因此分別以人肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞株和人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株為考察對(duì)象,試驗(yàn)中分為單純細(xì)胞組、單純超聲組、二氫卟吩e6組,空白脂質(zhì)體組,單純脂質(zhì)體1(普通脂質(zhì)體:Ce6磁性普通納米脂質(zhì)體),單純脂質(zhì)體2(聲敏脂質(zhì)體:Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體),聲動(dòng)力治療組(Ce6溶液+超聲治療),聲動(dòng)力治療組1(普通脂質(zhì)體+超聲治療),聲動(dòng)力治療組2(聲敏脂質(zhì)體+超聲治療),采用MTT比色法,考察在不同的超聲參數(shù)下,Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制情況,計(jì)算抑制率,并與普通脂質(zhì)體及未超聲時(shí)進(jìn)行比較�？疾煲陨蟽烧叩目鼓[瘤活性以及各組不同濃度水平的抗腫瘤情況。3結(jié)果3.1根據(jù)藥物性質(zhì),建立了紫外分光光度計(jì)分析方法,并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果表明,其線性范圍及精密度、穩(wěn)定性、回收率等均符合實(shí)驗(yàn)要求。3.2通過(guò)對(duì)制備方法和制備材料進(jìn)行篩選,本實(shí)驗(yàn)選擇EPC和膽固醇為載體材料,按照薄膜分散-真空冷凍干燥技術(shù)制備,通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)行篩選、優(yōu)化。3.3確定了制備工藝條件為有機(jī)相三氯甲烷,水化介質(zhì)水,水化時(shí)間60min,水化溫度50℃。優(yōu)選的配方工藝條件為藥脂比1:50,卵磷脂-膽固醇(5:1),tween-80用量0.5%,藥磁比1:2。制備的Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體透射電鏡下呈球形粒子分布,其外觀圓整、大小均一,平均包封率90.28%,滲漏率3.28%,粒徑176.9nm。3.4未經(jīng)超聲時(shí),對(duì)比游離Ce6溶液,Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的體外釋放度表現(xiàn)出一定的緩釋效果。當(dāng)采用超聲天使治療儀,固定超聲頻率1.0MHz,與Ce6磁性普通脂質(zhì)體相比,隨著超聲時(shí)間(0～150s)和超聲強(qiáng)度(0～2.0W/cm2)的增加,Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的體外累積釋放度也隨之增大,表現(xiàn)出良好的體外聲敏特性。3.5實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)于兩種腫瘤細(xì)胞,聲動(dòng)力治療組2相對(duì)于其他組藥物都顯示出了更好的抑制效果。聲敏脂質(zhì)體的藥物濃度分別在2.5～7.5μg/mL及2.5～1Oμg/mL,未經(jīng)聲動(dòng)力治療時(shí),對(duì)SPC-A-1及MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞均呈抑制作用。對(duì)于SPC-A-1腫瘤細(xì)胞,固定超聲頻率1.0MHz,當(dāng)超聲時(shí)間60s,超聲強(qiáng)度為0.5W/cm2,聲動(dòng)力治療組2對(duì)其抑制率隨著聲敏脂質(zhì)體藥物濃度的增加(2.5～7.5μg/mL)而增加;當(dāng)超聲強(qiáng)度為0.5W/cm2時(shí),聲動(dòng)力治療組2(2.5～7.5μg/mL)的抑制率隨著超聲時(shí)間(30～120s)的增加而有所升高(P0.05);當(dāng)超聲時(shí)間為60s時(shí),聲動(dòng)力治療組2(2.5～μg/mL)的抑制率隨著超聲強(qiáng)度(0.5～2.0 W/cm2)的增加而顯著提高(P0.05)。另外,對(duì)于MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞,固定超聲頻率1.0MHz,當(dāng)超聲時(shí)間60s,超聲強(qiáng)度為1.0W/cm2,聲動(dòng)力治療組2對(duì)其抑制率隨著聲敏脂質(zhì)體藥物濃度的增加(2.5～10μg/mL)而增加;當(dāng)超聲強(qiáng)度為1.0 W/cm2時(shí),聲動(dòng)力治療組2(2.5～10μg/mL)的抑制率隨著超聲時(shí)間(30～120s)的增加而有所升高(P0.05);當(dāng)超聲時(shí)間為60s時(shí),聲動(dòng)力治療組(2.5～10μg/mL)的抑制率隨著超聲強(qiáng)度(0.5～2.0W/ccm2)的增加而顯著提高(P0.05)。4結(jié)論4.1薄膜分散-真空冷凍干燥技術(shù)適用于Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的制備。以蛋黃卵磷脂作為聲敏脂質(zhì)體的制備材料,包封率為指標(biāo),通過(guò)正交試驗(yàn)進(jìn)行影響因素篩選,可以制得聲敏性良好的脂質(zhì)體。4.2用油酸進(jìn)行磁性Fe304表面的改性,有利于提高磁粉的親油性,使磁粉與脂質(zhì)體表面的結(jié)合更容易,形成的穩(wěn)定磁性脂質(zhì)體混懸體系,在外加磁場(chǎng)的引導(dǎo)下,能夠聚集在腫瘤部位。4.3研究Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性試驗(yàn),利用超聲天使治療儀裝置,在設(shè)定的濃度范圍內(nèi),經(jīng)過(guò)不同超聲時(shí)間(0～150s)和超聲強(qiáng)度(0～2.0 W/cm2)作用下,聲動(dòng)力組2相比其他實(shí)驗(yàn)組對(duì)人肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1細(xì)胞和人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞抑制率都有所提高,并且在相同超聲參數(shù)處理下,Ce6磁性聲敏納米脂質(zhì)體對(duì)SPC-A-1腫瘤細(xì)胞的抑制率大于MDA-MA-231腫瘤細(xì)胞(P0.05)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943;R96

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本文編號(hào)：1610608