本文關(guān)鍵詞： 2-甲氧基雌二醇 PLGA 復(fù)方 藥效學(xué) 植入劑　出處：《鄭州大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：2-甲氧基雌二醇（2-methoxyestradiol，2-ME）最早是在孕婦的尿液中被發(fā)現(xiàn)的雌激素代謝產(chǎn)物，但其幾乎不發(fā)揮內(nèi)雌激素樣作用。近幾年來，很多研究表明該化合物是一種特異性高毒性低的新型抗腫瘤藥物，對(duì)多種惡性腫瘤有抑制作用，其在國外的研究處于Ⅱ期臨床階段。由于它水溶性差，口服吸收無規(guī)律，靜脈注射半衰期短（約為12min），國內(nèi)外研究將其制備成固體納米脂質(zhì)體、磷脂復(fù)合物、混懸劑等克服2-ME的缺點(diǎn)，但效果仍不佳。本研究以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）為載體，以2-ME和吉非替尼為主藥，制備成復(fù)方2-ME緩釋植入劑，通過皮下瘤旁局部給藥方式給藥，使藥物直接發(fā)揮作用，并能達(dá)到緩釋長效的作用。 本研究用SRB法檢測了2-ME和吉非替尼單獨(dú)以及二者聯(lián)合對(duì)MCF-7、A549、4T-1細(xì)胞的增殖抑制作用，2-ME對(duì)三種細(xì)胞作用72h的IC50值分別為0.96μmol·L-1、0.866μmol·L-1、0.692μmol·L-1，可知不同細(xì)胞系對(duì)藥物的敏感性不同。在0.625μmol·L-1~10.0μmol·L-1濃度范圍內(nèi)，2-ME對(duì)A549的抑制率隨著時(shí)間的增加而增大，作用48h的IC50為1.993μmol·L-1，可知2-ME和吉非替尼的抗腫瘤作用具有明顯的時(shí)間濃度依賴性。2-ME和吉非替尼在低濃度時(shí)聯(lián)合對(duì)A549作用的聯(lián)合指數(shù)低至0.17（CI1），二者在一定濃度范圍內(nèi)聯(lián)合具有協(xié)同作用。以藥物對(duì)A549細(xì)胞的聯(lián)合指數(shù)為指標(biāo)，篩選出2-ME和吉非替尼聯(lián)合抗腫瘤活性最佳的配比為2.2:1（w/w）。 確立了檢測復(fù)方制劑中2-ME和吉非替尼含量的分析方法----高效液相色譜法。色譜條件為：流動(dòng)相是甲醇：水（75:25），柱溫25℃，，流速是0.1ml·min-1，紫外檢測器波長為285nm。建立了2-ME和吉非替尼的線性回歸方程，分別為：A=0.2599C+0.0488（r=0.9998）， A=0.4004C－0.1305（r=0.9999）�？疾炝嗽谠撋V條件下，2-ME的日間、日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.57%和1.38%，吉非替尼的日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.93%和1.08%；2-ME的平均回收率為99.87%（RSD=0.90%，n=9），吉非替尼的平均回收率為99.55%（RSD=0.67%，n=9）。該色譜條件和方法完全滿足實(shí)驗(yàn)要求。 通過測定2-ME和吉非替尼在不同釋放介質(zhì)中的溶解度，最終確定用于體外釋放的介質(zhì)為1%SDS-PBS溶液。本實(shí)驗(yàn)采用單因素考察法，考察了不同型號(hào)的PLGA、不同載藥量、不同的制備工藝和方法對(duì)制劑釋放行為的影響，確定了作為制劑載體的PLGA的型號(hào)為PLGA（75:25）；制劑的載藥量為60%；最終采用制劑的制備方法為溶劑揮發(fā)法。體外釋放第6天、16天、30天時(shí)，2-ME分別累計(jì)釋放33.9%、56.6%、73.1%，制劑有緩釋作用。對(duì)體外釋放結(jié)果進(jìn)行擬合，顯示制劑中2-ME和吉非替尼的釋放均與Ritger-Peppas方程擬合較好，二者釋放行為一致。 考察了制劑的體內(nèi)釋放，藥物第13天、45天、54天的累計(jì)釋放百分?jǐn)?shù)達(dá)到30%、50%、72.8%，表明該植入劑具有緩釋作用。將植入劑的體內(nèi)釋放結(jié)果進(jìn)行數(shù)學(xué)模型擬合，結(jié)果顯示2-ME和吉非替尼的釋放與Ritger-Peppas方程擬合較好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9957和0.9924，兩藥的體內(nèi)釋放行為一致。根據(jù)Ritger-Peppas，其釋藥機(jī)理是骨架溶蝕和藥物擴(kuò)散的共同作用。且制劑中2-ME和吉非替尼體內(nèi)外釋放相關(guān)性良好。 本研究采用在小鼠右前肢背側(cè)皮下的部位接種S180細(xì)胞懸液的方法建立腫瘤模型，以相對(duì)腫瘤增殖率為考察指標(biāo)，研究復(fù)方2-ME緩釋植入劑高、中、低劑量組對(duì)小鼠癌癥的抑制效果。復(fù)方2-ME緩釋植入劑高、中、劑量組的相對(duì)腫瘤增殖率分別為：38.55%、38.96%、49.13%，空白PLGA組為82.29%。結(jié)果顯示，復(fù)方制劑的高、中劑量組的相對(duì)腫瘤增殖率40%，能抑制腫瘤的增殖；空白PLGA組和植入劑低劑量組對(duì)S180腫瘤無效。
[Abstract]:2- methoxyestradiol (2-methoxyestradiol, 2-ME) is the earliest estrogen metabolites were found in the urine of pregnant women, but it almost does not play in estrogenic effects. In recent years, many studies show that this compound is a novel antitumor drug with high specificity and low toxicity, has inhibitory effect on a variety of malignant tumors in the Foreign Studies in phase II clinical stage. Due to its poor water solubility, absorption of oral, intravenous injection of short half-life (about 12min), the domestic and foreign research to prepare a solid nano liposome, phospholipid complex, mixed suspensions and other shortcomings overcome 2-ME, but the effect is still poor. In this study, poly lactic acid glycolic acid copolymer (PLGA) as the carrier, with 2-ME and gefitinib based medicine, prepared compound 2-ME sustained-release implants, administered by subcutaneous tumor by topical administration, the drug directly play a role, and can achieve sustained release A long effect.
This study used SRB method to detect the 2-ME and gefitinib alone and the combination of the two MCF-7, inhibited the proliferation of A549,4T-1 cells, 2-ME cells of three 72h IC50 = 0.96 mol - L-1,0.866 mol - L-1,0.692 mol - L-1, susceptibility to drugs of different show different cell lines in 0.625 ~ mol ~ L-1~10.0 ~ mol ~ L-1 concentration range, 2-ME inhibition rate of A549 increases with the increase of time, the effect of 48h IC50 1.993 mol, L-1, 2-ME and gefitinib antitumor effect has obvious concentration dependent.2-ME and gefitinib in when combined with low concentration index on the role of A549 as low as 0.17 (CI1), the combination of the two has a synergistic effect in a certain concentration range. The drug combination index of A549 cells were selected as indexes, 2-ME and gefitinib combined with the ratio of antitumor activity for the best 2.2:1 (w/w).
The detection of 2-ME in compound preparation and gefitinib imatinib content analysis method -- high performance liquid chromatography. The chromatography conditions were: mobile phase is methanol: water (75:25), the column temperature was 25 degrees, the flow rate is 0.1ml / min-1, the UV detector wavelength was 285nm. to 2-ME and gefitinib line the regression equation, respectively: A=0.2599C+0.0488 (r=0.9998), A=0.4004C 0.1305 (r=0.9999) were investigated. Under the chromatographic conditions, 2-ME day, days of the relative standard deviation is 1.57% and 1.38% respectively, gefitinib days during the day, the relative standard deviation is 0.93% and 1.08%; the average recovery rate of 2-ME 99.87% (RSD=0.90%, n=9), gefitinib, the average recovery rate was 99.55% (RSD=0.67%, n=9). The chromatographic conditions and the method can meet the experimental requirements.
Through the determination of 2-ME and non Kyrgyzstan solubility of imatinib in different release media, and ultimately determine the medium for in vitro release of 1%SDS-PBS solution. The experimental study using single factor method, the effects of different types of PLGA and different drug loading, preparation process and different methods to influence the drug release behavior, identified as preparation of vector PLGA model PLGA (75:25); preparation of the drug loading was 60%; the final preparations for the preparation method using solvent evaporation method. The in vitro release of sixth days, 16 days, 30 days, 2-ME were 56.6%, 73.1% and 33.9% cumulative release, sustained release preparation, in vitro release to fit. The results show, in the preparation of 2-ME and gefitinib release with Ritger-Peppas equation, the release behavior of two is consistent.
Effects of in vivo drug release formulations, thirteenth days, 45 days, 54 days, the cumulative release percentage reached 30%, 50%, 72.8%, showed that the implant with sustained-release effect. The implants in vivo release results were fitted to a mathematical model, the results show that 2-ME and gefitinib release and the Ritger-Peppas equation, the better correlation the coefficient of R were 0.9957 and 0.9924, two drug release behavior in vivo. According to Ritger-Peppas, the release mechanism is the interaction of skeleton dissolution and drug diffusion. And in the preparation of 2-ME and gefitinib in vivo release good correlation.
Based on the method of subcutaneous in mouse right forelimb dorsal parts of the cell suspension were inoculated with S180 tumor model, the relative tumor growth rate as the study index, study of compound 2-ME sustained-release implants in high, low dose group, the inhibitory effect on mouse cancer. Compound 2-ME sustained-release implantation agent in high dose group. The relative tumor growth rates were: 38.55%, 38.96%, 49.13%, blank group PLGA 82.29%. showed that the compound high, middle dose group relative tumor growth rate of 40%, can inhibit the proliferation of tumor cells; blank PLGA group and low dose group implants ineffective on S180 tumor.

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R943

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本文編號(hào)：1545481