本文關(guān)鍵詞： 表皮生長(zhǎng)因子 皮膚類似物 屏障功能 氣液界面培養(yǎng) 相對(duì)濕度 形態(tài)結(jié)構(gòu)　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：本研究擬為經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究提供新型皮膚模型。通過(guò)皮膚類似物的制備及評(píng)價(jià),以初步了解其特性。在此基礎(chǔ)上,以皮膚類似物的結(jié)構(gòu)特征、分化標(biāo)志物的表達(dá)、屏障功能、分子結(jié)構(gòu)等為指標(biāo),優(yōu)選皮膚類似物的氣液界面培養(yǎng)時(shí)間、生長(zhǎng)環(huán)境相對(duì)濕度及培養(yǎng)基中是否加入表皮生長(zhǎng)因子,并與優(yōu)化前屏障功能相比較,以期得到與人類皮膚相似、在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究中能替代動(dòng)物皮膚等皮膚模型的新型皮膚替代物。方法：(1)皮膚類似物的制備及評(píng)價(jià)設(shè)定培養(yǎng)環(huán)境為95%RH,不添加表皮生長(zhǎng)因子,氣液界面培養(yǎng)3周,制備皮膚類似物。通過(guò)肉眼觀察、電鏡觀察、滲透性實(shí)驗(yàn),初步了解皮膚類似物的特性。(2)皮膚類似物生長(zhǎng)環(huán)境的優(yōu)選：①設(shè)定不同的氣液界面培養(yǎng)時(shí)間,收獲皮膚類似物,通過(guò)肉眼觀察、電鏡觀察、免疫組織化學(xué)法、傅里葉紅外光譜法、滲透性實(shí)驗(yàn)篩選皮膚類似物的氣液界面培養(yǎng)時(shí)間。②設(shè)定95%RH及75%RH兩個(gè)環(huán)境相對(duì)濕度,分別制備皮膚類似物。以吲哚美辛為模型藥,滲透性實(shí)驗(yàn)篩選培養(yǎng)環(huán)境相對(duì)濕度。③氣液界面培養(yǎng)階段培養(yǎng)基中添加或者不添加表皮生長(zhǎng)因子,制備皮膚類似物。以吲哚美辛為模型藥,滲透性實(shí)驗(yàn)研究氣液界面培養(yǎng)階段表皮生長(zhǎng)因子對(duì)皮膚類似物屏障功能的影響。(3)皮膚類似物的評(píng)價(jià)①肉眼觀察皮膚類似物的宏觀形態(tài)結(jié)構(gòu)特征,并與人類在體皮膚比較。②馬松染色研究皮膚類似物中細(xì)胞及纖維蛋白的分布情況,并與人類皮膚比較。③掃描電鏡觀察皮膚類似物表面結(jié)構(gòu),并與人類皮膚比較。④透射電鏡研究皮膚類似物角質(zhì)層及皮膚各層間連接的變化,并與人類皮膚比較。⑤以吲哚美辛、氫化可的松、咖啡因?yàn)槟Ｐ退?以大鼠、小鼠、裸鼠及Start-M膜為對(duì)照,考察皮膚類似物對(duì)不同油水分配系數(shù)模型藥的滲透屏障特性。⑥優(yōu)化前后,皮膚類似物屏障功能的比較。結(jié)果：(1)皮膚類似物具有與人類皮膚相似的表皮層和真皮層,并呈現(xiàn)出與人類皮膚相似的超微結(jié)構(gòu),但是表皮層不完整；對(duì)吲哚美辛的經(jīng)皮滲透具有一定的屏障作用,其屏障作用與Start-M膜相似,但是與大鼠相比有較大差距。(2)皮膚類似物生長(zhǎng)的最佳條件為75%RH,不添加表皮生長(zhǎng)因子,氣液界面培養(yǎng)3周。(3)皮膚類似物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、角蛋白10的表達(dá)及超微結(jié)構(gòu)與人類皮膚非常相似,具有一定的機(jī)械強(qiáng)度。而絲聚合蛋白的表達(dá)被過(guò)度激活。皮膚類似物對(duì)不同油水分配系數(shù)模型藥經(jīng)皮滲透均有屏障作用,總體來(lái)說(shuō),對(duì)親脂性化合物的屏障作用相對(duì)較高,接近小鼠,但與其他動(dòng)物皮膚仍有一定差距；對(duì)親水性化合物屏障作用相對(duì)較弱,與Start-M膜相似。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)室制備的皮膚類似物在一定程度上與人類皮膚相似,通過(guò)培養(yǎng)環(huán)境的優(yōu)化使其屏障作用有所提高,但是其在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)研究中替代動(dòng)物皮膚使用仍然需要通過(guò)努力提高其屏障功能。
[Abstract]:Objective: to provide a new skin model for the study of transdermal drug delivery system. Through the preparation and evaluation of the skin analogue, the characteristics of the skin analogue were preliminarily understood. On this basis, the structural characteristics of the skin analogues and the expression of differentiation markers were used. The barrier function, molecular structure and so on were used as indexes. The culture time of gas-liquid interface of skin analogue, the relative humidity of growth environment and whether the epidermal growth factor was added to the culture medium were selected, and compared with those before the optimization of barrier function. In order to obtain a new skin substitute, similar to human skin, which can replace animal skin and other skin models in the study of transdermal drug delivery system. Methods the preparation and evaluation of skin analogue was determined to be 95 RH and no epidermal growth factor was added. Skin analogue was prepared by gas-liquid interface culture for 3 weeks. Through naked eye observation, electron microscope observation and permeability experiment, the characteristics of skin analogues were preliminarily understood. The skin analogue was harvested. The relative humidity of 95RH and 75RH were set at the gas-liquid interface culture time of the skin analogue by naked eye observation, electron microscope observation, immunohistochemistry, Fourier transform infrared spectroscopy and permeability experiment. Indomethacin was used as model drug to screen the culture medium with or without epidermal growth factor (EGF) in the culture medium at the gas-liquid interface stage of relative humidity (RH. 3). Preparation of skin analogue. Using indomethacin as model drug, The effect of epidermal growth factor on the barrier function of skin analogue during gas-liquid interface culture. Evaluation of skin analogue: 1 the macroscopic morphological and structural characteristics of the skin analogue were observed with naked eyes. The distribution of cell and fibrin in the skin analogue was studied by using 2.2-#china_person0# staining compared with the human skin in vivo, and the surface structure of the skin analogue was observed by scanning electron microscope (SEM) compared with the human skin. Compared with human skin, transmission electron microscope (TEM) was used to study the changes of keratinocytes and interlaminar junctions of skin analogues, and to compare with human skin by indomethacin, hydrocortisone, coffee as model drug, rats and mice. In nude mice and Start-M membrane, the permeability barrier characteristics of skin analogue to different oil-water partition coefficient model drugs were investigated before and after optimization. Results the skin analogue has the similar epidermis and dermis to the human skin, and presents the ultrastructure similar to the human skin, but the epidermis is incomplete. The barrier effect of indomethacin was similar to that of Start-M membrane, but there was a big gap between rats and rats. The optimum condition for the growth of skin analogue was 75RH without adding epidermal growth factor (EGF). The morphology, expression and ultrastructure of keratin 10 were very similar to those of human skin. The expression of silk polymeric protein was over-activated. The skin analogue had a barrier effect on the transdermal permeation of different oil-water partition coefficient drugs, but the barrier effect on lipophilic compounds was relatively high. It is close to mice, but still has a certain gap with other animal skin, and has relatively weak barrier effect on hydrophilic compounds and is similar to Start-M membrane. Conclusion: the skin analogues prepared in laboratory are similar to human skin to some extent. The barrier function is improved by optimizing the culture environment, but it is still necessary to improve the barrier function by replacing the animal skin in the study of transdermal drug delivery system.
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1543740