本文關(guān)鍵詞： 脈絡(luò)膜新生血管 氧化應(yīng)激 褪黑素 視網(wǎng)膜色素上皮細胞 血管內(nèi)皮細胞　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：通過建立ARPE-19與人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Epithelial Cell, HUVE C)共培養(yǎng)體系,應(yīng)用褪黑素對氧化應(yīng)激條件下的體系進行干預(yù),研究HUVEC細胞的增殖和血管生成的變化,探討作用的可能機制。方法：選用ARPE-19細胞系及HUVEC原代細胞培養(yǎng),應(yīng)用Transwell小室進行接觸及非接觸式共培養(yǎng)建立共培養(yǎng)體系。應(yīng)用褪黑素、氧化劑對共培養(yǎng)體系進行干預(yù)。細胞增殖實驗和血管生成實驗對HUVE C細胞進行形態(tài)學(xué)觀察。收集上清,用ELISA法對于血管生成相關(guān)的因子VEGF及PEDF進行檢測。分別收集HUVEC及ARPE-19,應(yīng)用Western Blot和細胞免疫化學(xué)方法檢測細胞中VEGF、PEDF含量,應(yīng)用qPCR檢測細胞中VEGF、PEDF的mRNA表達。結(jié)果：第一部分：應(yīng)用接觸式與非接觸式兩種方法建立ARPE-19與HUVEC共培養(yǎng)模型,確定實驗中的氧化劑濃度及作用時間。氧化劑刺激后,HUVEC增殖力和血管生成能力增強。兩種共培養(yǎng)方式的細胞增殖和血管生成在氧化應(yīng)激條件下無差異。第二部分：褪黑素處理組與氧化劑組相比,HUVEC細胞增殖力下降,血管生成減少。培養(yǎng)體系上清的ELISA結(jié)果顯示,氧化劑組相對于對照組VEGF增多、PEDF減少,褪黑素處理組相對氧化劑組VEGF減少、PEDF增多。計算VEGF/PEDF比值,氧化劑組相對于對照組VEGF/PED F升高,褪黑素處理組VEGF/PEDF相對氧化劑組降低。比較兩種共培養(yǎng)方式在不同干預(yù)條件下的各因子含量,接觸式共培養(yǎng)的對照組、氧化劑組、褪黑素處理組VEGF及VEGF/PEDF比值均較非接觸式共培養(yǎng)組高。PEDF兩種培養(yǎng)方式相比較無統(tǒng)計學(xué)差異。共培養(yǎng)體系中,HUVEC細胞和ARPE-19細胞在氧化劑組的VEGF水平相對于對照組升高,褪黑素處理組相對于氧化劑組VEGF下降。氧化劑組PEDF含量相對于對照組下降,褪黑素處理組相對于氧化劑組PEDF升高。qPCR結(jié)果與Western Blot結(jié)果一致。第三部分：研究褪黑素對HVUEC的直接作用及作用機制。氧化劑組的細胞增殖較對照組增強,褪黑素干預(yù)組較氧化劑組降低。氧化劑組血管生成數(shù)較對照組增多,褪黑素處理組較氧化劑組血管生成數(shù)少。上清中,氧化劑組相對對照組VEGF增多、PEDF降低、VEGF/PEDF增高,褪黑素處理組相對于氧化劑組VEGF降低、PEDF升高、VEGF/PEDF降低。氧化劑組相對對照組VEGF合成及InRNA表達增多、PEDF合成及mRNA表達降低,褪黑素處理組相對于氧化劑組VEGF合成及InRNA表達降低、PEDF合成及mRNA表達升高。比較不同培養(yǎng)方式,在未有氧化劑刺激的情況下,H UVEC單獨培養(yǎng)組與共培養(yǎng)組的 HUVEC增殖力和血管生成能力無差別。氧化劑刺激后,共培養(yǎng)組較單獨培養(yǎng)組的HUVEC增殖力和血管生成能力增強。氧化劑組中,共培養(yǎng)VEGF/PEDF比值較單獨培養(yǎng)更高,對照組和褪黑素處理組中共培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)的VEGF/PEDF無差異。研究褪黑素能否通過ARPE-19作用于HUVEC及其機制。將ARPE-19分成對照組、氧化劑組、褪黑素處理組,與HUVEC共培養(yǎng)。氧化劑組的HUVEC細胞增殖較對照組增強,褪黑素干預(yù)組較氧化劑組降低。氧化劑組血管生成數(shù)較對照組增多,褪黑素處理組較氧化劑組血管生成數(shù)少。上清中,氧化劑組相對對照組VEGF增多、PEDF降低、VEGF/PEDF增高,褪黑素處理組相對于氧化劑組VEGF降低、PEDF升高、VEGF/PEDF降低。ARPE-19細胞中,氧化劑組相對對照組VEGF合成及mRN A表達增多、PEDF合成及mRNA表達降低,褪黑素處理組相對于氧化劑組VEGF合成及mRNA表達降低、PEDF合成及mRNA表達升高。結(jié)論：氧化應(yīng)激條件下,共培養(yǎng)體系中HUVEC增殖和血管生成增強。褪黑素使共培養(yǎng)體系中的VEGF下降,PEDF升高,VEGF/PEDF比值減小,調(diào)節(jié)了ARPE-19及HUVE C的VEGF及PEDF合成和表達,降低了HUVEC的增殖力和血管生成力。褪黑素可直接作用于HUVEC,調(diào)節(jié)VEGF、PEDF的基因表達和蛋白合成,降低氧化應(yīng)激刺激后HUVEC的增殖和血管生成能力。褪黑素可通過調(diào)節(jié)ARPE-19的VEGF、PED F的基因表達和蛋白合成,影響HUVEC細胞的增殖和合成。
[Abstract]:Objective : To study the effects of melatonin on proliferation and angiogenesis of HUVEC by establishing a co - culture system of ARPE - 19 and human umbilical vein endothelial cells ( HUVE C ) . Compared with the control group , the growth of VEGF and the expression of VEGF / PEDF in the treated group were higher than those in the control group .

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【共引文獻】

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本文編號：1508498