本文關(guān)鍵詞：麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥抗A型流感病毒效應(yīng)影響的研究

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【摘要】：目的:探討麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥體內(nèi)、外抗A型流感病毒的效應(yīng)及機(jī)理,為中西醫(yī)結(jié)合治療流感的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)支持。方法:1.應(yīng)用血清藥理學(xué)方法制備麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清對(duì)狗腎傳代細(xì)胞(MDCK)的最大無毒濃度范圍,同步設(shè)麻杏石甘湯含藥血清對(duì)照組、奧司他韋含藥血清對(duì)照組、空白血清對(duì)照組。2.以MTT法檢測(cè)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清在直接滅活病毒給藥方式、預(yù)防感染給藥方式、治療感染給藥方式中,對(duì)A型流感病毒感染的MDCK細(xì)胞活性的影響,并以2-(4-methylumbellifery1)-α-D-N-acetylneuraminic acid(MUNANA)為底物,檢測(cè)這三種給藥方式下,A型流感病毒神經(jīng)氨酸酶的活性。3.小鼠經(jīng)鼻腔接種A型流感病毒,建立動(dòng)物感染模型,經(jīng)藥物或生理鹽水灌胃后,檢測(cè)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)A型流感病毒小鼠的治療作用。結(jié)果:1.濃度為25%~3.125%的大鼠空白血清對(duì)MDCK細(xì)胞無明顯毒性,與大鼠空白血清組比較,濃度為6.25%~25%的麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥含藥血清組(聯(lián)合用藥含藥血清組)的MDCK細(xì)胞活性O(shè)D值無明顯差異(P0.05)。2.麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒的作用:(1)直接滅活病毒給藥方式下,麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng):1)對(duì)流感病毒感染MDCK細(xì)胞活性的影響:與正常對(duì)照組比較,病毒對(duì)照組細(xì)胞活性O(shè)D值顯著降低(P0.01)。與病毒對(duì)照組比較,濃度為6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘湯含藥血清組、奧司他韋含藥血清組、麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥含藥血清組(聯(lián)合用藥含藥血清組)MDCK細(xì)胞活性顯著提高,OD值升高(P0.01)且藥物組存在一定量效關(guān)系;與麻杏石甘湯含藥血清組相比較,聯(lián)合用藥含藥血清組OD值顯著升高(P0.05)。2)對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的影響:與正常對(duì)照組相比,病毒對(duì)照組NA活性的熒光值顯著升高(P0.01)。與病毒對(duì)照組相比,空白血清組及各含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。與麻杏石甘湯含藥血清組相比,聯(lián)合用藥含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。(2)預(yù)防感染給藥方式下,麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng):1)對(duì)流感病毒感染MDCK細(xì)胞活性的影響:與正常對(duì)照組比較,病毒對(duì)照組細(xì)胞活性O(shè)D值顯著降低(P0.01)。與病毒對(duì)照組比較,濃度為6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘湯含藥血清組、奧司他韋含藥血清組、聯(lián)合用藥含藥血清組MDCK細(xì)胞活性顯著提高,OD值升高(P0.01),且藥物組存在一定量效關(guān)系;與麻杏石甘湯含藥血清組比較,聯(lián)合用藥含藥血清組OD值顯著升高(P0.05)。2)對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的影響:與正常對(duì)照組相比,病毒對(duì)照組NA活性的熒光值顯著升高(P0.01)。與病毒對(duì)照組相比,空白血清組及各含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。與麻杏石甘湯含藥血清組相比,聯(lián)合用藥含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。(3)治療感染給藥方式下,麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng):1)對(duì)流感病毒感染MDCK細(xì)胞活性的影響:與正常對(duì)照組比較,病毒對(duì)照組細(xì)胞活性O(shè)D值顯著降低(P0.01)。與病毒對(duì)照組比較,濃度為6.25%、12.5%、25%的麻杏石甘湯含藥血清組、奧司他韋含藥血清組、聯(lián)合用藥含藥血清組MDCK細(xì)胞活性顯著提高,OD值升高(P0.01),且藥物組存在一定量效關(guān)系;與麻杏石甘湯含藥血清組比較,聯(lián)合用藥含藥血清組OD值顯著升高(P0.05)。2)對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的影響:與正常對(duì)照組相比,病毒對(duì)照組NA活性的熒光值顯著升高(P0.01)。與病毒對(duì)照組相比,空白血清組及各含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。與麻杏石甘湯含藥血清組相比,聯(lián)合用藥含藥血清組NA活性的熒光值顯著降低(P0.01)。3.麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥體內(nèi)對(duì)A型流感病毒感染小鼠的治療作用:(1)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠體重的影響:與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組體重顯著降低(P0.01)。與模型對(duì)照組相比,麻杏石甘湯組、奧司他韋組、麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥組(聯(lián)合用藥組)小鼠體重明顯增加(P0.01),體重下降抑制率分別為27.08%、29.32%、29.41%。與麻杏石甘湯組相比,聯(lián)合用藥組小鼠體重明顯增加(P0.01)。(2)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響:與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組肺指數(shù)明顯增加(P0.01)。與模型對(duì)照組相比,麻杏石甘湯組、奧司他韋組、聯(lián)合用藥組小鼠肺指數(shù)明顯降低(P0.01),肺指數(shù)抑制率分別為33.64%、40.21%、40.50%。與麻杏石甘湯組相比,聯(lián)合用藥組小鼠肺指數(shù)明顯降低(P0.01)。(3)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響:與正常對(duì)照組相比,模型對(duì)照組脾指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著降低(P0.01)。與模型對(duì)照組相比,麻杏石甘湯組、奧司他韋組、聯(lián)合用藥組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)明顯增加(P0.01)。與奧司他韋組相比,聯(lián)合用藥組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)增加(P0.05)。(4)麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠肺組織病理變化的影響:正常對(duì)照組小鼠肺臟呈淡粉紅色,質(zhì)地柔軟,肺葉表面光滑潤(rùn)澤,含氣,無實(shí)變區(qū)。模型對(duì)照組小鼠肺臟出現(xiàn)不同程度的肺炎病理改變,肺葉有充血現(xiàn)象,呈現(xiàn)暗褐色外觀。經(jīng)藥物干預(yù)后各組病變程度均有不同程度的減輕。改善程度依次是聯(lián)合用藥組、奧司他韋組、麻杏石甘湯組。結(jié)論:1.MDCK細(xì)胞能較好地感染A型流感病毒,可以作為病毒復(fù)制的理想載體。2.麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清在直接滅活病毒給藥方式、預(yù)防病毒感染給藥方式及治療病毒感染給藥方式下對(duì)A型流感病毒感染的MDCK細(xì)胞的活性有保護(hù)作用,對(duì)流感病毒神經(jīng)氨酸酶的活性有抑制作用,其效果優(yōu)于麻杏石甘湯組。3.含藥血清的抗病毒作用不僅與藥物直接吸收入血的有效成分和濃度相關(guān),還與大鼠機(jī)體存在的補(bǔ)體及酶等內(nèi)源性活性物質(zhì)的水平相關(guān)。所以本次實(shí)驗(yàn)通過大鼠空白血清對(duì)照以排除血清的非藥物性干擾。4.麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)A型流感病毒感染小鼠有保護(hù)作用,能抑制流感病毒感染所致的體重下降,降低肺指數(shù),減輕肺組織病理?yè)p傷,效果優(yōu)于麻杏石甘湯組,聯(lián)合用藥組能提高脾指數(shù)、胸腺指數(shù),效果優(yōu)于奧司他韋組。
【關(guān)鍵詞】：麻杏石甘湯 奧司他韋 含藥血清 A型流感病毒 MDCK細(xì)胞 神經(jīng)氨酸酶 肺指數(shù)
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-15
• 引言15-17
• 1.材料與方法17-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 1.1.1 主要儀器17
• 1.1.2 主要試劑17-18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)藥物18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-24
• 1.2.1 制備含藥血清19
• 1.2.2 大鼠含藥血清對(duì)MDCK細(xì)胞毒性作用的檢測(cè)19-20
• 1.2.3 病毒半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)感染量（TCID50）的檢測(cè)20
• 1.2.4 麻杏石甘湯聯(lián)合奧司他韋用藥含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng)的檢測(cè)20-23
• 1.2.5 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥體內(nèi)對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用23-24
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
• 2.結(jié)果與分析25-36
• 2.1 大鼠含藥血清對(duì)MDCK細(xì)胞毒性作用檢測(cè)25
• 2.2 病毒半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)感染量（TCID50）的測(cè)定25-26
• 2.3 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗流感病毒效應(yīng)的影響26-33
• 2.3.1 直接滅活病毒給藥方式下，麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng)26-29
• 2.3.2 預(yù)防感染給藥方式下，麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng)29-31
• 2.3.3 治療感染給藥方式下，，麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥的含藥血清體外抗A型流感病毒效應(yīng)31-33
• 2.4 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥體內(nèi)對(duì)流感病毒感染小鼠的影響33-36
• 2.4.1 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠體重的影響33-34
• 2.4.2 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響34
• 2.4.3 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響34-35
• 2.4.4 麻杏石甘湯與奧司他韋聯(lián)合用藥對(duì)流感病毒感染小鼠肺組織病理變化程度的影響35-36
• 3.討論36-40
• 4.結(jié)論40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述 防治流感的藥物研究進(jìn)展及思考45-58
• 參考文獻(xiàn)51-58

【參考文獻(xiàn)】

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