本文關鍵詞：miR-143在甲狀腺相關性眼病中的作用機制及糖皮質激素臨床沖擊治療研究

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【摘要】：目的：通過研究miR-143對甲狀腺相關性眼病(thyroid-associated ophthalmopat hy, TAO)患者眶后成纖維細胞(OFs)促甲狀腺激素受體(TSHR)表達的調控及透明質酸(HA)分泌的影響,探討miRNA-143在TAO發(fā)生與發(fā)展中的分子機制。且通過臨床研究評價大劑量糖皮質激素沖擊治療方法對TAO的療效及對腎上腺皮質功能的影響。 方法：取TAO患者及對照組成纖維細胞原代培養(yǎng),運用免疫熒光技術進行鑒定。通過Real-time PCR方法檢測兩組眶后成纖維細胞miRNA-143的表達量,驗證芯片結果準確性。人工合成反義寡核苷酸(anti-miR-143)和miR-143模擬體(miR-143m imics),轉染至TAO患者成纖維細胞,應用Real-Time PCR和Western blotting方法檢測轉染細胞中TSHR mRNA及蛋白的表達變化,雙熒光素酶報告基因檢測miRNA-143的作用靶點。ELISA法測定眶后成纖維細胞轉染前后HA分泌量的變化。臨床研究將48例活動性中、重度TAO患者采用分層隨機方法分為間歇治療組(24例)和維持治療組(24例)。兩組患者分別于沖擊治療前,沖擊治療結束后第4周及第24周進行療效與不良反應評定,并檢測血清皮質醇(F)晝夜節(jié)律、促腎上腺皮質激素(ACTH)及24小時尿皮質醇水平,分析兩種治療方案療效及對腎上腺皮質功能的影響。 結果：1.與對照組眶后成纖維細胞相比,miR-143基因在TAO患者中呈低水平表達,與基因芯片結果一致。2.miRNA-143過表達后成纖維細胞的TSHR mRNA的表達水平下降,對應的TSHR蛋白的表達水平下降；相反,miR-143抑制性表達后TSHR的mRNA及蛋白表達水平升高,P0.05。雙熒光素酶報告基因載體方法證實miR-143直接作用于TSHR mRNA的3'UTR區(qū)發(fā)揮作用。3.miR-143抑制性表達后對成纖維細胞HA的分泌起到促進作用。4.糖皮質激素間歇治療組、維持治療組療效(有效率分別為83.3%、87.5%,無效或惡化率分別為16.7%、12.5%,F=0.68；復發(fā)率分別為20%、19.0%,F=0.94)無顯著差異,維持治療組患者在沖擊治療結束后第4周腎上腺皮質功能受到顯著抑制(P0.05),在沖擊治療結束后第24周均恢復正常。 結論：在TAO患者眶后成纖維細胞中miR-143基因呈顯著低表達,通過上調TSHR的表達水平,促進成纖維細胞的HA的分泌參與TAO的發(fā)生與發(fā)展。臨床大劑量甲基強的松龍間歇沖擊治療TAO有效,維持治療患者療效無顯著改善,且腎上腺皮質功能抑制更加明顯。
【關鍵詞】：miR-143 甲狀腺相關性眼病 TSHR 糖皮質激素
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R771.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-14
• 參考文獻12-14
• 第一部分 體外成纖維細胞的培養(yǎng)以及microRNA143表達14-27
• 一、材料與方法15-21
• 二、實驗結果21-25
• 三、討論25-26
• 四、小結26
• 參考文獻26-27
• 第二部分 miRNA-143對TSHR的調控作用及對HA分泌的影響27-46
• 一、材料與方法30-40
• 五、實驗結果40-44
• 六、討論44
• 七、小結44-45
• 參考文獻45-46
• 第三部分 TAO沖擊治療的臨床研究46-56
• 一、研究對象46-47
• 二、研究方法47-48
• 三、結果48-53
• 四、討論53-54
• 五、小結54-55
• 參考文獻55-56
• 討論56-59
• 綜述59-74
• 參考文獻68-74
• 致謝74

【共引文獻】

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本文編號：997221