本文關(guān)鍵詞：miR-143在甲狀腺相關(guān)性眼病中的作用機(jī)制及糖皮質(zhì)激素臨床沖擊治療研究

  更多相關(guān)文章： miR-143 甲狀腺相關(guān)性眼病 TSHR 糖皮質(zhì)激素

【摘要】：目的：通過研究miR-143對甲狀腺相關(guān)性眼病(thyroid-associated ophthalmopat hy, TAO)患者眶后成纖維細(xì)胞(OFs)促甲狀腺激素受體(TSHR)表達(dá)的調(diào)控及透明質(zhì)酸(HA)分泌的影響,探討miRNA-143在TAO發(fā)生與發(fā)展中的分子機(jī)制。且通過臨床研究評價大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊治療方法對TAO的療效及對腎上腺皮質(zhì)功能的影響。 方法：取TAO患者及對照組成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng),運用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行鑒定。通過Real-time PCR方法檢測兩組眶后成纖維細(xì)胞miRNA-143的表達(dá)量,驗證芯片結(jié)果準(zhǔn)確性。人工合成反義寡核苷酸(anti-miR-143)和miR-143模擬體(miR-143m imics),轉(zhuǎn)染至TAO患者成纖維細(xì)胞,應(yīng)用Real-Time PCR和Western blotting方法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中TSHR mRNA及蛋白的表達(dá)變化,雙熒光素酶報告基因檢測miRNA-143的作用靶點。ELISA法測定眶后成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后HA分泌量的變化。臨床研究將48例活動性中、重度TAO患者采用分層隨機(jī)方法分為間歇治療組(24例)和維持治療組(24例)。兩組患者分別于沖擊治療前,沖擊治療結(jié)束后第4周及第24周進(jìn)行療效與不良反應(yīng)評定,并檢測血清皮質(zhì)醇(F)晝夜節(jié)律、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)及24小時尿皮質(zhì)醇水平,分析兩種治療方案療效及對腎上腺皮質(zhì)功能的影響。 結(jié)果：1.與對照組眶后成纖維細(xì)胞相比,miR-143基因在TAO患者中呈低水平表達(dá),與基因芯片結(jié)果一致。2.miRNA-143過表達(dá)后成纖維細(xì)胞的TSHR mRNA的表達(dá)水平下降,對應(yīng)的TSHR蛋白的表達(dá)水平下降；相反,miR-143抑制性表達(dá)后TSHR的mRNA及蛋白表達(dá)水平升高,P0.05。雙熒光素酶報告基因載體方法證實miR-143直接作用于TSHR mRNA的3'UTR區(qū)發(fā)揮作用。3.miR-143抑制性表達(dá)后對成纖維細(xì)胞HA的分泌起到促進(jìn)作用。4.糖皮質(zhì)激素間歇治療組、維持治療組療效(有效率分別為83.3%、87.5%,無效或惡化率分別為16.7%、12.5%,F=0.68；復(fù)發(fā)率分別為20%、19.0%,F=0.94)無顯著差異,維持治療組患者在沖擊治療結(jié)束后第4周腎上腺皮質(zhì)功能受到顯著抑制(P0.05),在沖擊治療結(jié)束后第24周均恢復(fù)正常。 結(jié)論：在TAO患者眶后成纖維細(xì)胞中miR-143基因呈顯著低表達(dá),通過上調(diào)TSHR的表達(dá)水平,促進(jìn)成纖維細(xì)胞的HA的分泌參與TAO的發(fā)生與發(fā)展。臨床大劑量甲基強(qiáng)的松龍間歇沖擊治療TAO有效,維持治療患者療效無顯著改善,且腎上腺皮質(zhì)功能抑制更加明顯。
【關(guān)鍵詞】：miR-143 甲狀腺相關(guān)性眼病 TSHR 糖皮質(zhì)激素
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R771.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 第一部分 體外成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)以及microRNA143表達(dá)14-27
• 一、材料與方法15-21
• 二、實驗結(jié)果21-25
• 三、討論25-26
• 四、小結(jié)26
• 參考文獻(xiàn)26-27
• 第二部分 miRNA-143對TSHR的調(diào)控作用及對HA分泌的影響27-46
• 一、材料與方法30-40
• 五、實驗結(jié)果40-44
• 六、討論44
• 七、小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-46
• 第三部分 TAO沖擊治療的臨床研究46-56
• 一、研究對象46-47
• 二、研究方法47-48
• 三、結(jié)果48-53
• 四、討論53-54
• 五、小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-56
• 討論56-59
• 綜述59-74
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：997221