本文關鍵詞：沉默GLRX3基因對鼻咽癌細胞的生物學影響

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【摘要】：目的：驗證GLRX3(glutaredoxin3)基因在鼻咽癌中的轉錄表達水平,利用RNAi技術建立穩(wěn)定沉默GLRX3基因的鼻咽癌細胞株HONE1,探索GLRX3基因在鼻咽癌細胞中的惡性生物學功能,為鼻咽癌的發(fā)病機制及治療提供理論依據。 方法：1、采用Real time PCR技術檢測鼻咽癌細胞株HONE1、HNE1、 CNE1、CNE2、5-8F、TW03及正常鼻咽上皮細胞株NP69,鼻咽癌活檢組織及正常鼻咽上皮組織中GLRX3基因的轉錄表達水平,探討GLRX3基因在鼻咽癌中的轉錄表達改變情況。篩選高表達GLRX3基因的鼻咽癌細胞株,為下一步基因沉默實驗提供研究對象。2、采用RNAi技術構建靶向GLRX3基因的逆轉錄病毒shRNA干擾載體,將其轉染入病毒包裝細胞PA317中,收集病毒液感染鼻咽癌細胞株HONE1, puromycin篩選建立穩(wěn)定沉默GLRX3基因的HONE1細胞株。采用Real time PCR驗證HONE1細胞中GLRX3的轉錄水平,并通過MTT比色實驗、克隆形成實驗和劃痕實驗檢測沉默GLRX3后鼻咽癌細胞的增殖能力、克隆形成能力及遷移運動能力,以評價沉默GLRX3基因后鼻咽癌細胞腫瘤生物學行為的改變。 結果：1、與正常鼻咽上皮組織及正常鼻咽上皮細胞株NP69相比,GLRX3基因在鼻咽癌活檢組織及鼻咽癌細胞株中表達上調；HONE1細胞在6個鼻咽癌細胞株中的GLRX3轉錄表達水平最高,可以作為下一步基因沉默實驗的研究對象。2、成功構建4個GLRX3shRNA-pBINNS2干擾載體均可抑制GLRX3基因的轉錄表達；MTT比色實驗、平板克隆形成實驗及劃痕實驗的結果提示沉默GLRX3基因可抑制HONE1細胞的增殖、克隆形成和遷移運動。 結論：1、GLRX3基因在鼻咽癌細胞和原發(fā)腫瘤組織中表達上調。2、沉默GLRX3基因可抑制鼻咽癌細胞的惡性生物學行為。3、GLRX3基因可能是鼻咽癌的候選癌基因。
【關鍵詞】：鼻咽癌 GLRX3 RNA干擾 shRNA 逆轉錄病毒載體
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 目錄3-5
• 縮略詞表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 第一部分 GLRX3基因在鼻咽癌中轉錄表達的研究14-25
• 1 材料和方法14-20
• 2 結果20-22
• 3 討論22-24
• 4 小結24-25
• 第二部分 沉默GLRX3基因對鼻咽癌細胞增殖與侵襲的影響25-46
• 1 材料和方法25-35
• 2 結果35-41
• 3 討論41-45
• 4 小結45-46
• 全文總結46-47
• 參考文獻47-53
• 綜述53-66
• 參考文獻61-66
• 致謝66

【參考文獻】

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本文編號：948013