本文關(guān)鍵詞：沉默GLRX3基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞的生物學(xué)影響

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【摘要】：目的：驗(yàn)證GLRX3(glutaredoxin3)基因在鼻咽癌中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,利用RNAi技術(shù)建立穩(wěn)定沉默GLRX3基因的鼻咽癌細(xì)胞株HONE1,探索GLRX3基因在鼻咽癌細(xì)胞中的惡性生物學(xué)功能,為鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制及治療提供理論依據(jù)。 方法：1、采用Real time PCR技術(shù)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞株HONE1、HNE1、 CNE1、CNE2、5-8F、TW03及正常鼻咽上皮細(xì)胞株NP69,鼻咽癌活檢組織及正常鼻咽上皮組織中GLRX3基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,探討GLRX3基因在鼻咽癌中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)改變情況。篩選高表達(dá)GLRX3基因的鼻咽癌細(xì)胞株,為下一步基因沉默實(shí)驗(yàn)提供研究對(duì)象。2、采用RNAi技術(shù)構(gòu)建靶向GLRX3基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒shRNA干擾載體,將其轉(zhuǎn)染入病毒包裝細(xì)胞PA317中,收集病毒液感染鼻咽癌細(xì)胞株HONE1, puromycin篩選建立穩(wěn)定沉默GLRX3基因的HONE1細(xì)胞株。采用Real time PCR驗(yàn)證HONE1細(xì)胞中GLRX3的轉(zhuǎn)錄水平,并通過(guò)MTT比色實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默GLRX3后鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力、克隆形成能力及遷移運(yùn)動(dòng)能力,以評(píng)價(jià)沉默GLRX3基因后鼻咽癌細(xì)胞腫瘤生物學(xué)行為的改變。 結(jié)果：1、與正常鼻咽上皮組織及正常鼻咽上皮細(xì)胞株NP69相比,GLRX3基因在鼻咽癌活檢組織及鼻咽癌細(xì)胞株中表達(dá)上調(diào)；HONE1細(xì)胞在6個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株中的GLRX3轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平最高,可以作為下一步基因沉默實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。2、成功構(gòu)建4個(gè)GLRX3shRNA-pBINNS2干擾載體均可抑制GLRX3基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)；MTT比色實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示沉默GLRX3基因可抑制HONE1細(xì)胞的增殖、克隆形成和遷移運(yùn)動(dòng)。 結(jié)論：1、GLRX3基因在鼻咽癌細(xì)胞和原發(fā)腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)。2、沉默GLRX3基因可抑制鼻咽癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。3、GLRX3基因可能是鼻咽癌的候選癌基因。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 GLRX3 RNA干擾 shRNA 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 目錄3-5
• 縮略詞表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 第一部分 GLRX3基因在鼻咽癌中轉(zhuǎn)錄表達(dá)的研究14-25
• 1 材料和方法14-20
• 2 結(jié)果20-22
• 3 討論22-24
• 4 小結(jié)24-25
• 第二部分 沉默GLRX3基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞增殖與侵襲的影響25-46
• 1 材料和方法25-35
• 2 結(jié)果35-41
• 3 討論41-45
• 4 小結(jié)45-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 綜述53-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：948013