本文關(guān)鍵詞：鼻息肉成纖維細(xì)胞在常氧與低氧環(huán)境下的原代培養(yǎng)及鑒定

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【摘要】：目的：探討人鼻息肉的成纖維細(xì)胞在常氧與低氧環(huán)境下的細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定,以備下一步為研究鼻息肉成纖維細(xì)胞的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供比較優(yōu)良的細(xì)胞系,及后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究人鼻息肉的成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性。 方法：取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科2012年10月～2013年3月的住院患者,經(jīng)行鼻內(nèi)鏡下鼻息肉切除手術(shù)的息肉組織共20例。取出息肉后立即將息肉標(biāo)本放入4℃的無菌磷酸鹽緩沖液(PBS溶液)中,在超凈臺(tái)上培養(yǎng)皿中用PBS溶液反復(fù)沖洗、浸泡息肉組織,去除組織內(nèi)的紅細(xì)胞及分泌物。將洗好息肉組織剪成1～2mm大小的組織塊后,分成2份轉(zhuǎn)移到準(zhǔn)備好的EP管中,分別把1ml的0.1%Ⅰ型膠原蛋白酶和1ml的dispase Ⅱ酶放入2個(gè)EP管中消化過夜。次日取出組織后,放入10ml的離心管中用移液槍輕輕吹打消化后的組織,分離出更多的細(xì)胞。分別對(duì)2種酶消化后得到的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)后,移入60mm培養(yǎng)皿中,加入組織培養(yǎng)液(DMEM+10%胎牛血清+100mg/L鏈霉素+1×105U/L青霉素)后,分別放在常氧與低氧環(huán)境下進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)。(常氧原代培養(yǎng)是以普通空氣作為培養(yǎng)箱內(nèi)的混合氣體,控制氧體積分?jǐn)?shù)含量為20%；低氧原代培養(yǎng)則是利用氮?dú)庾鳛榕囵B(yǎng)箱內(nèi)的混合氣體,調(diào)控氧體積分?jǐn)?shù)含量至5%。二種原代培養(yǎng)方法的其他培養(yǎng)環(huán)境均一致,都是37℃的溫度,相對(duì)飽和濕度和含體積分?jǐn)?shù)為5%的C02。)利用倒置相差顯微鏡,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)、生長繁殖狀況、有無污染。最后對(duì)人鼻息肉成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)進(jìn)行初步形態(tài)學(xué)的鑒定后,再用波形蛋白單克隆抗體對(duì)培養(yǎng)后的原代細(xì)胞行免疫組化染色鑒定。用CCK-8比色法檢測成纖維細(xì)胞的增殖變化,描繪其生長曲線。 結(jié)果:dispase Ⅱ酶消化組的細(xì)胞數(shù)目明顯高于Ⅰ型膠原酶消化組,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？梢詮娜吮窍⑷饨M織中分離出成纖維細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行原代培養(yǎng)后,在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)呈梭形、星形、不規(guī)則形或多突的紡錘形,胞核較大呈圓形或橢圓形,細(xì)胞胞質(zhì)向外突出,一般有2-3個(gè)長短不齊的觸角,細(xì)胞中央有卵圓形細(xì)胞核。在細(xì)胞密度高時(shí),細(xì)胞之間的排列方式多為平行排列,或呈放射狀、漩渦狀排列。對(duì)本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行波形蛋白單克隆抗體免疫組化染色,免疫組化染色后細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕色或棕褐色的標(biāo)志物者為陽性細(xì)胞,證實(shí)其為成纖維細(xì)胞。在常氧及低氧環(huán)境下培養(yǎng)的人鼻息肉成纖維細(xì)胞的生長曲線無明顯差異。 結(jié)論：經(jīng)dispase Ⅱ酶消化的組織細(xì)胞數(shù)目較多,是一種較好獲得組織細(xì)胞的技術(shù)方法。本實(shí)驗(yàn)中在常氧及低氧環(huán)境下,均可建立比較穩(wěn)定、可靠的人體鼻腔鼻黏膜成纖維細(xì)胞的原代細(xì)胞培養(yǎng)模型,這種模型就可以為下—步研究鼻息肉成纖維細(xì)胞的相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供比較優(yōu)良的細(xì)胞系,及后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究人鼻息肉的成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性。
【關(guān)鍵詞】：鼻息肉 常氧環(huán)境 低氧環(huán)境 成纖維細(xì)胞 原代培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R765.25
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號(hào)說明10-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-25
• 研究結(jié)果25-27
• 討論27-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 致謝39-40
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文40-41
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表41

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 楊琳紅;董震;;人鼻黏膜上皮細(xì)胞HIF-1α和VEGF的表達(dá)及意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2008年08期

2 姜舒,董震,朱冬冬,楊占泉;缺氧對(duì)鼻息肉上皮細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子的影響[J];中華耳鼻咽喉科雜志;2002年01期

3 于睿莉;朱冬冬;董震;;慢性鼻-鼻竇炎鼻息肉內(nèi)鏡術(shù)后糖皮質(zhì)激素對(duì)鼻黏膜重塑的影響[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2006年10期

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本文編號(hào)：928245