本文關(guān)鍵詞：DC在高危角膜移植排斥反應(yīng)中免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：培養(yǎng)和誘導(dǎo)大鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC），研究未成熟樹突狀細(xì)胞（immature dendritic cell，imDC）對(duì)高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用，探討imDC誘導(dǎo)免疫耐受的機(jī)制。 方法：聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colonystimulating factor，GM-CSF）和白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）-4培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴(kuò)增大量的imDC，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，，TNF-α）誘導(dǎo)其成為成熟樹突狀細(xì)胞（maturedendritic cell，mDC），結(jié)合形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表面標(biāo)志加以鑒定；以60只SD大鼠為受體，30只Wistar大鼠為供體，堿燒傷建立同種異體高危角膜移植模型。受體SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、imDC組和mDC組，每組20只；對(duì)照組：術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射PBS液0.1ml；imDC組和mDC組分別于術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射體外培養(yǎng)的供體骨髓來(lái)源的imDC和mDC1×106個(gè)。術(shù)后每日裂隙燈下觀察各組角膜植片存活情況并評(píng)分；于術(shù)后3d、7d、14d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每組隨機(jī)處死4只受體大鼠，取角膜植片行HE染色；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)角膜植片Th1型細(xì)胞因子（IL-12、IL-15、IL-18）和Th2型細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）mRNA表達(dá)水平；蛋白印跡法（Western blot）分析檢測(cè)各組大鼠脾臟CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表面特異性標(biāo)志轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)。 結(jié)果：通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細(xì)胞因子，培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴(kuò)增大量的DC，經(jīng)倒置相差顯微鏡、掃射電鏡的形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞儀進(jìn)行免疫學(xué)表型檢測(cè)，可證實(shí)為不同成熟狀態(tài)下的DC。角膜移植術(shù)后，觀察角膜植片存活時(shí)間，imDC組植片存活時(shí)間與對(duì)照組、mDC組比較顯著延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為P0.05）；RT-PCR檢測(cè)：imDC組Th1型細(xì)胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表達(dá)較對(duì)照組和mDC組明顯降低；Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10mRNA表達(dá)明顯升高；Western blot檢測(cè)：各時(shí)間點(diǎn)Foxp3表達(dá)的相對(duì)吸光度值imDC組均明顯高于對(duì)照組和mDC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為P0.05）。 結(jié)論：通過(guò)聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細(xì)胞因子能培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴(kuò)增出大量的DC；輸注體外培養(yǎng)的供體骨髓來(lái)源的imDC可以誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受，減輕免疫排斥反應(yīng)，有效延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間；imDC可能主要通過(guò)誘導(dǎo)Th1/Th2細(xì)胞偏移和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增參與免疫耐受的形成。
【關(guān)鍵詞】：未成熟樹突狀細(xì)胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R779.65
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-23
• 1 材料12-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 1.2 主要試劑和實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• 1.3 相關(guān)試劑的配制13-14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-23
• 2.1 大鼠骨髓源DC的分離培養(yǎng)及擴(kuò)增14-15
• 2.2 DC的鑒定15-16
• 2.3 動(dòng)物分組及處理16
• 2.4 角膜新生血管模型的建立16
• 2.5 高危角膜移植模型的建立（Wistar→角膜血管化的SD）16-17
• 2.6 術(shù)后裂隙燈觀察及評(píng)分17-18
• 2.7 排除標(biāo)準(zhǔn)18
• 2.8 角膜取材及標(biāo)本 HE 染色18
• 2.9 RT-PCR檢測(cè)植片IL-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL-10mRNA的表達(dá)18-20
• 2.10 Western blot分析檢測(cè)各組大鼠脾臟Foxp3的表達(dá)20-22
• 2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 附圖45-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 作者簡(jiǎn)介60-61
• 導(dǎo)師評(píng)閱表61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 林芳;高曉唯;任兵;肖云;楊玉潔;;Avastin對(duì)大鼠角膜新生血管的抑制及超微結(jié)構(gòu)的影響[J];國(guó)際眼科雜志;2009年04期

2 刁玉梅;李兵;;細(xì)胞與角膜移植免疫耐受[J];國(guó)際眼科雜志;2010年09期

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本文編號(hào)：918997