本文關(guān)鍵詞：DC在高危角膜移植排斥反應(yīng)中免疫調(diào)節(jié)機制的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 未成熟樹突狀細胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 調(diào)節(jié)性T細胞

【摘要】：目的：培養(yǎng)和誘導(dǎo)大鼠骨髓來源的樹突狀細胞（dendritic cell，DC），研究未成熟樹突狀細胞（immature dendritic cell，imDC）對高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用，探討imDC誘導(dǎo)免疫耐受的機制。 方法：聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colonystimulating factor，GM-CSF）和白細胞介素（Interleukin，IL）-4培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增大量的imDC，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，，TNF-α）誘導(dǎo)其成為成熟樹突狀細胞（maturedendritic cell，mDC），結(jié)合形態(tài)學(xué)、細胞表面標志加以鑒定；以60只SD大鼠為受體，30只Wistar大鼠為供體，堿燒傷建立同種異體高危角膜移植模型。受體SD大鼠隨機分為對照組、imDC組和mDC組，每組20只；對照組：術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射PBS液0.1ml；imDC組和mDC組分別于術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射體外培養(yǎng)的供體骨髓來源的imDC和mDC1×106個。術(shù)后每日裂隙燈下觀察各組角膜植片存活情況并評分；于術(shù)后3d、7d、14d三個時間點，每組隨機處死4只受體大鼠，取角膜植片行HE染色；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測角膜植片Th1型細胞因子（IL-12、IL-15、IL-18）和Th2型細胞因子（IL-4、IL-10）mRNA表達水平；蛋白印跡法（Western blot）分析檢測各組大鼠脾臟CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表面特異性標志轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達。 結(jié)果：通過聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細胞因子，培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增大量的DC，經(jīng)倒置相差顯微鏡、掃射電鏡的形態(tài)學(xué)觀察、流式細胞儀進行免疫學(xué)表型檢測，可證實為不同成熟狀態(tài)下的DC。角膜移植術(shù)后，觀察角膜植片存活時間，imDC組植片存活時間與對照組、mDC組比較顯著延長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均為P0.05）；RT-PCR檢測：imDC組Th1型細胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表達較對照組和mDC組明顯降低；Th2型細胞因子IL-4、IL-10mRNA表達明顯升高；Western blot檢測：各時間點Foxp3表達的相對吸光度值imDC組均明顯高于對照組和mDC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均為P0.05）。 結(jié)論：通過聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細胞因子能培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增出大量的DC；輸注體外培養(yǎng)的供體骨髓來源的imDC可以誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受，減輕免疫排斥反應(yīng)，有效延長移植物的存活時間；imDC可能主要通過誘導(dǎo)Th1/Th2細胞偏移和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的擴增參與免疫耐受的形成。
【關(guān)鍵詞】：未成熟樹突狀細胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 調(diào)節(jié)性T細胞
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R779.65
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-23
• 1 材料12-14
• 1.1 實驗動物12
• 1.2 主要試劑和實驗儀器12-13
• 1.3 相關(guān)試劑的配制13-14
• 2 實驗方法14-23
• 2.1 大鼠骨髓源DC的分離培養(yǎng)及擴增14-15
• 2.2 DC的鑒定15-16
• 2.3 動物分組及處理16
• 2.4 角膜新生血管模型的建立16
• 2.5 高危角膜移植模型的建立（Wistar→角膜血管化的SD）16-17
• 2.6 術(shù)后裂隙燈觀察及評分17-18
• 2.7 排除標準18
• 2.8 角膜取材及標本 HE 染色18
• 2.9 RT-PCR檢測植片IL-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL-10mRNA的表達18-20
• 2.10 Western blot分析檢測各組大鼠脾臟Foxp3的表達20-22
• 2.11 統(tǒng)計學(xué)處理22-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-45
• 附圖45-52
• 綜述52-59
• 參考文獻56-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60-61
• 導(dǎo)師評閱表61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：918997