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DC在高危角膜移植排斥反應(yīng)中免疫調(diào)節(jié)機制的實驗研究

發(fā)布時間:2017-09-25 18:34

  本文關(guān)鍵詞:DC在高危角膜移植排斥反應(yīng)中免疫調(diào)節(jié)機制的實驗研究


  更多相關(guān)文章: 未成熟樹突狀細胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 調(diào)節(jié)性T細胞


【摘要】:目的:培養(yǎng)和誘導(dǎo)大鼠骨髓來源的樹突狀細胞(dendritic cell,DC),研究未成熟樹突狀細胞(immature dendritic cell,imDC)對高危角膜移植免疫排斥反應(yīng)的抑制作用,探討imDC誘導(dǎo)免疫耐受的機制。 方法:聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colonystimulating factor,GM-CSF)和白細胞介素(Interleukin,IL)-4培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增大量的imDC,腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,,TNF-α)誘導(dǎo)其成為成熟樹突狀細胞(maturedendritic cell,mDC),結(jié)合形態(tài)學(xué)、細胞表面標志加以鑒定;以60只SD大鼠為受體,30只Wistar大鼠為供體,堿燒傷建立同種異體高危角膜移植模型。受體SD大鼠隨機分為對照組、imDC組和mDC組,每組20只;對照組:術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射PBS液0.1ml;imDC組和mDC組分別于術(shù)前7d經(jīng)尾靜脈注射體外培養(yǎng)的供體骨髓來源的imDC和mDC1×106個。術(shù)后每日裂隙燈下觀察各組角膜植片存活情況并評分;于術(shù)后3d、7d、14d三個時間點,每組隨機處死4只受體大鼠,取角膜植片行HE染色;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測角膜植片Th1型細胞因子(IL-12、IL-15、IL-18)和Th2型細胞因子(IL-4、IL-10)mRNA表達水平;蛋白印跡法(Western blot)分析檢測各組大鼠脾臟CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞表面特異性標志轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達。 結(jié)果:通過聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細胞因子,培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增大量的DC,經(jīng)倒置相差顯微鏡、掃射電鏡的形態(tài)學(xué)觀察、流式細胞儀進行免疫學(xué)表型檢測,可證實為不同成熟狀態(tài)下的DC。角膜移植術(shù)后,觀察角膜植片存活時間,imDC組植片存活時間與對照組、mDC組比較顯著延長,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.05);RT-PCR檢測:imDC組Th1型細胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表達較對照組和mDC組明顯降低;Th2型細胞因子IL-4、IL-10mRNA表達明顯升高;Western blot檢測:各時間點Foxp3表達的相對吸光度值imDC組均明顯高于對照組和mDC組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P0.05)。 結(jié)論:通過聯(lián)合應(yīng)用重組大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三種細胞因子能培養(yǎng)、誘導(dǎo)、擴增出大量的DC;輸注體外培養(yǎng)的供體骨髓來源的imDC可以誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受,減輕免疫排斥反應(yīng),有效延長移植物的存活時間;imDC可能主要通過誘導(dǎo)Th1/Th2細胞偏移和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞的擴增參與免疫耐受的形成。
【關(guān)鍵詞】:未成熟樹突狀細胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 調(diào)節(jié)性T細胞
【學(xué)位授予單位】:石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號】:R779.65
【目錄】:
  • 摘要6-7
  • Abstract7-8
  • 英文縮略語表8-9
  • 前言9-12
  • 材料與方法12-23
  • 1 材料12-14
  • 1.1 實驗動物12
  • 1.2 主要試劑和實驗儀器12-13
  • 1.3 相關(guān)試劑的配制13-14
  • 2 實驗方法14-23
  • 2.1 大鼠骨髓源DC的分離培養(yǎng)及擴增14-15
  • 2.2 DC的鑒定15-16
  • 2.3 動物分組及處理16
  • 2.4 角膜新生血管模型的建立16
  • 2.5 高危角膜移植模型的建立(Wistar→角膜血管化的SD)16-17
  • 2.6 術(shù)后裂隙燈觀察及評分17-18
  • 2.7 排除標準18
  • 2.8 角膜取材及標本 HE 染色18
  • 2.9 RT-PCR檢測植片IL-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL-10mRNA的表達18-20
  • 2.10 Western blot分析檢測各組大鼠脾臟Foxp3的表達20-22
  • 2.11 統(tǒng)計學(xué)處理22-23
  • 結(jié)果23-30
  • 討論30-40
  • 結(jié)論40-41
  • 參考文獻41-45
  • 附圖45-52
  • 綜述52-59
  • 參考文獻56-59
  • 致謝59-60
  • 作者簡介60-61
  • 導(dǎo)師評閱表61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 林芳;高曉唯;任兵;肖云;楊玉潔;;Avastin對大鼠角膜新生血管的抑制及超微結(jié)構(gòu)的影響[J];國際眼科雜志;2009年04期

2 刁玉梅;李兵;;細胞與角膜移植免疫耐受[J];國際眼科雜志;2010年09期

3 陸燕,鄒留河,呂嵐,李瑩,陳虹;大鼠角膜移植排斥動物模型的建立[J];實驗動物科學(xué)與管理;2002年03期

4 余昆;茍欣;;樹突狀細胞誘導(dǎo)的器官移植后免疫耐受[J];生命的化學(xué);2009年06期

5 荊國利;高曉唯;;Bevacizumab對大鼠角膜新生血管的抑制作用[J];眼科新進展;2010年07期



本文編號:918997

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