本文關(guān)鍵詞：STGC3基因表達(dá)下調(diào)對(duì)NP69細(xì)胞系蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響

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【摘要】：目的：運(yùn)用RNAi技術(shù)，敲低NP69細(xì)胞系中STGC3基因的表達(dá)；采用iTRAQ同位素標(biāo)記及質(zhì)譜分析，研究STGC3基因表達(dá)下調(diào)對(duì)NP69細(xì)胞系蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響，篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)分子，探討STGC3基因調(diào)控的相關(guān)分子網(wǎng)絡(luò)，為闡明鼻咽癌發(fā)病的分子機(jī)制提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：參照RNAi的設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)靶向干擾STGC3基因表的發(fā)夾樣序列（shorthairoin RNAs, shRNA），構(gòu)建pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3真核表達(dá)載體，并對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序及比對(duì)分析；隨后將重組質(zhì)粒用LPTM2000轉(zhuǎn)染NP69細(xì)胞，經(jīng)G418篩選，建立穩(wěn)定低表達(dá)STGC3的pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細(xì)胞系；采用RT-PCR驗(yàn)證pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、 pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三組細(xì)胞STGC3基因的mRNA表達(dá)水平；分別提取pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三組細(xì)胞的總蛋白，進(jìn)行蛋白酶解，iTRAQ同位素標(biāo)記，高效液相色譜儀分離，四級(jí)桿 靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜分析，獲取蛋白質(zhì)表達(dá)豐度信息，對(duì)所獲取蛋白質(zhì)表達(dá)信息進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)搜索分析，篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)分子；運(yùn)用生物信息學(xué)方法，分析差異蛋白質(zhì)的相互作用。 結(jié)果：經(jīng)測(cè)序及Blast比對(duì)，證實(shí)pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重組質(zhì)粒構(gòu)建成功；通過(guò)熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重組質(zhì)粒的NP69細(xì)胞可見(jiàn)GFP表達(dá)，表明重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功；RT-PCR結(jié)果顯示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3導(dǎo)入NP69細(xì)胞，可有效降低STGC3基因的表達(dá)，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細(xì)胞系成功建立；iTRAQ同位素標(biāo)記及質(zhì)譜技術(shù)，，分析pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，共鑒定出83個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中上調(diào)蛋白45個(gè)，下調(diào)蛋白38個(gè)。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，這些差異蛋白質(zhì)分子與蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、凋亡及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能相關(guān)，并初步構(gòu)建了蛋白質(zhì)的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。 結(jié)論： 1．成功建立pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細(xì)胞系。 2．STGC3基因在NP69細(xì)胞的表達(dá)降低，可導(dǎo)致NP69細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜發(fā)生改變，本實(shí)驗(yàn)鑒定出83個(gè)差異蛋白質(zhì)分子，其中上調(diào)蛋白質(zhì)45個(gè)，下調(diào)蛋白質(zhì)38個(gè)，其功能涉及蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、凋亡及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。
【關(guān)鍵詞】：STGC3 鼻咽癌 NP69細(xì)胞系 iTRAQ 質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 技術(shù)路線11-12
• 材料與方法12-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-42
• 討論42-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-60
• 附錄一60-62
• 附錄二62-63
• 綜述63-73
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 在讀期間發(fā)表的論文與參與課題73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 賀修勝,陳主初,田芳,肖志強(qiáng),賀智敏,關(guān)勇軍,李峰,何春梅,袁建輝;鼻咽癌中染色體3p21區(qū)域一個(gè)表達(dá)下調(diào)的EST的鑒定[J];癌癥;2003年01期

2 賀修勝,肖志強(qiáng),陳主初,趙素萍,朱建華,賀智敏,李友軍,田芳,余艷輝;STGC3新基因的克隆及功能初步分析[J];癌癥;2004年10期

3 蘭炎根;陳舒華;;鼻咽癌蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展[J];海南醫(yī)學(xué);2010年06期

4 鄧敏;賀修勝;羅橋;趙帥;曾超;李艷蘭;;Tet調(diào)控STGC3基因表達(dá)CNE2細(xì)胞系的建立及其功能初步研究[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2006年01期

5 胡波;邱青朝;賀修勝;羅橋;唐國(guó)華;龍治峰;廖銀花;;雌激素對(duì)轉(zhuǎn)STGC3基因CNE2細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖的影響[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2007年05期

6 李麗;賀修勝;羅橋;張志偉;姚旭炯;陳蘇瓊;李春成;王莉莉;段蓉;陳主初;;STGC3基因缺失突變對(duì)CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力的影響[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2011年03期

7 賈小芳;石妮;熊繼先;謝錦云;梁宋平;;鼻咽癌細(xì)胞系與永生化的鼻咽上皮細(xì)胞系蛋白質(zhì)表達(dá)差異分析(英文)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2008年01期

本文編號(hào)：917042