本文關(guān)鍵詞：美滿霉素在大鼠視神經(jīng)損傷再生中的作用研究及對AIF、GFAP表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:視神經(jīng)損傷是以視功能進(jìn)行性下降為臨床特征的常見致盲性眼病，嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量，目前尚缺乏有效的治療藥物。視神經(jīng)是由神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells,RGCs）的軸突構(gòu)成，而視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡是各種視神經(jīng)損傷類疾病如青光眼、外傷性視神經(jīng)病變、顱內(nèi)占位疾病等視功能下降的共同根源，且研究表明視神經(jīng)損傷后RGCs死亡的重要方式是凋亡。故選擇能夠有效抑制視神經(jīng)損傷后RGCs凋亡并促進(jìn)其再生修復(fù)的藥物是至關(guān)重要的。美滿霉素（minocycline, MC）可通過抗凋亡、抗神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞過度激活、抗神經(jīng)炎癥等多種途徑發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,是一種有效的神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑。然而美滿霉素針對視神經(jīng)損傷后的抗凋亡、抗膠質(zhì)細(xì)胞過度激活、促神經(jīng)修復(fù)等作用及機(jī)制目前尚未明確。凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosis inducing factor,AIF)是主要的凋亡效應(yīng)蛋白。膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，可反應(yīng)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀態(tài)。 本研究制造了大鼠視神經(jīng)鉗夾傷模型，實驗組通過給予腹腔注射美滿霉素與觀察組進(jìn)行對比，取材后在光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學(xué)改變，并利用計算機(jī)圖像分析技術(shù)對經(jīng)免疫組織化學(xué)染色的視網(wǎng)膜組織中AIF、GFAP的平均光密度值(The average optical density value, AOD)進(jìn)行半定量檢測，以觀察二者在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)情況。從而探討美滿霉素對損傷后視神經(jīng)的再生修復(fù)作用及對視網(wǎng)膜組織中AIF、GFAP表達(dá)的影響，為其用于治療視神經(jīng)損傷提供理論依據(jù)。 方法:健康SD大鼠80只（80只右眼）雌雄不限，體重200±20g，隨機(jī)分四組：正常組、假損傷組（僅暴露右眼視神經(jīng)）、實驗組（行右眼視神經(jīng)鉗夾傷＋傷后即刻腹腔注射45mg/kg美滿霉素液，此后一次每日至觀察時間點）和對照組（行右眼視神經(jīng)鉗夾傷＋傷后即刻腹腔注射等量生理鹽水，此后一次每日至觀察時間點），每組20只大鼠（20只右眼）。分別按傷后1、3、7、14天四個時間點隨機(jī)取各組大鼠5只，進(jìn)行心臟灌注固定，摘除右側(cè)眼球并剔除多余組織，后將視網(wǎng)膜組織固定切片。光學(xué)顯微鏡下觀察經(jīng)HE染色后視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學(xué)變化，觀察經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后視網(wǎng)膜組織中AIF、GFAP的表達(dá)變化。利用計算機(jī)圖像分析技術(shù)對經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后視網(wǎng)膜組織中AIF、GFAP的平均光密度值(AOD)進(jìn)行半定量檢測。以免疫陽性染色的AOD來表示抗原表達(dá)量，AOD越高則陽性表達(dá)越強(qiáng)。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包分析資料，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示(x s)。同一時間點數(shù)據(jù)采用多樣本均數(shù)的單因素方差分析（One-way，ANOVA），組間數(shù)據(jù)采用SNK-q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1各組大鼠視網(wǎng)膜HE染色結(jié)果 正常組及假損傷組：視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)清晰各時間點無明顯變化，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈條帶狀排列無水腫及壞死。對照組：隨著損傷時間延長大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)明顯水腫，，可見空泡樣變性，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列混亂、細(xì)胞核明顯丟失稀疏。實驗組：損傷早期視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)較清晰，隨損傷時間的延長可見視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞水腫，但各時間點大鼠視網(wǎng)膜組織損傷程度均較對照組減輕，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列尚整齊，細(xì)胞核丟失程度較對照組輕。 2AIF、GFAP的免疫組織化學(xué)染色及半定量檢測結(jié)果 2.1AIF相關(guān)結(jié)果 AIF的免疫強(qiáng)陽性染色呈棕褐色表達(dá)于細(xì)胞漿，部分可表達(dá)于胞核內(nèi)。正常組及假損傷組可見呈弱陽性的淺黃染色，各時間點無明顯不同；對照組1d為弱陽性染色呈黃色，3d、7d呈持續(xù)性增強(qiáng)，7d達(dá)棕褐色，損傷14d染色明顯減弱接近1d時呈黃色；實驗組1d、3d、7d、14d均較對照組相應(yīng)時間點免疫染色弱。 免疫組化的半定量檢測結(jié)果：正常組與假損傷組半定量檢測的平均光密度值（AOD）在各時間點上差別均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），正常組1d時AOD為0.165±0.047；對照組1d、3d、7d、14d AOD分別為0.193±0.046、0.328±0.034、0.517±0.065、0.264±0.039與正常組各時間點相比差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且對照組均高于正常組；實驗組1d、3d、7d、14d AOD分別為0.184±0.018、0.239±0.024、0.287±0.028、0.189±0.009與正常組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且實驗組均高于正常組；對照組與實驗組相比各時間點差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且實驗組各時間點AOD均小于對照組。 2.2GFAP相關(guān)結(jié)果 GFAP的免疫強(qiáng)陽性表達(dá)成棕色，可位于視網(wǎng)膜內(nèi)界膜于外界膜之間各層。正常組及假損傷組可見呈弱陽性的淺黃染色，各時間點表達(dá)無明顯變化；對照組1d為弱陽性呈淺黃染色，3d染色加深，7d達(dá)呈高峰呈棕色，14d表達(dá)呈淺黃染色；實驗組除14d外表達(dá)均較對照組弱，實驗組14d時仍可達(dá)實驗組3d時表達(dá)水平強(qiáng)于對照組3d的表達(dá)，但3d、7d、14d仍明顯強(qiáng)于正常組。 免疫組化的半定量檢測結(jié)果：正常組與假損傷組半定量檢測平均光密度值（AOD）在各時間點上差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），正常組1d的AOD為0.178±0.085；對照組3d、7d AOD分別為0.328±0.034、0.484±0.025與正常組3d、7d AOD分別為0.168±0.013、0.182±0.085相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），兩時間點AOD對照組均大于正常組；實驗組3d、7d、14d的AOD分別為0.272±0.034、0.342±0.046、0.259±0.039與對照組3d、7d、14d的AOD分別為0.328±0.034、0.484±0.025、0.194±0.025相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），實驗組AOD3d、7d時低于對照組、14d時高于對照組；3d、7d、14d實驗組的AOD與正常組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且實驗組均高于正常組。 結(jié)論: 1應(yīng)用美滿霉素后視網(wǎng)膜組織的損傷程度較對照組明顯減輕，說明美滿霉素對受損的視神經(jīng)具有保護(hù)作用。 2應(yīng)用美滿霉素后視網(wǎng)膜組織中各時間點AIF表達(dá)水平均較對照組降低，證明美滿霉素能夠抑制視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織中AIF的表達(dá)。 3應(yīng)用美滿霉素后視神經(jīng)損傷早期視網(wǎng)膜中GFAP的表達(dá)水平較對照組減低，而損傷后期較對照組表達(dá)增加，證明美滿霉素可抑制視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織中GFAP的過度表達(dá)，并延長GFAP的有益表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：視神經(jīng)損傷 視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 美滿霉素 凋亡誘導(dǎo)因子 膠質(zhì)纖維酸性蛋白
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-16
• 結(jié)果16-18
• 附圖18-24
• 附表24-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述 膠質(zhì)纖維酸性蛋白、凋亡誘導(dǎo)因子與眼部疾病32-43
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 致謝43-44
• 個人簡歷44

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：910398