本文關(guān)鍵詞：烏司他丁在變應(yīng)性鼻炎中的治療作用及其與HO-1關(guān)系的研究

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【摘要】：目的：變應(yīng)性鼻炎是臨床常見(jiàn)慢性疾病，研究表明，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病不僅僅是傳統(tǒng)觀念所認(rèn)為的IgE介導(dǎo)的鼻黏膜Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，而且是易感個(gè)體接觸致敏變應(yīng)原后導(dǎo)致的包含IgE介導(dǎo)的炎癥遞質(zhì)的釋放和多種免疫活性細(xì)胞、Th1/Th2細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)失衡造成的鼻黏膜及粘膜下血管慢性炎癥性疾病。變應(yīng)性鼻炎全球發(fā)病率約為10%-25%，我國(guó)變應(yīng)性鼻炎的患病率約為9%-24.6%，而且隨著國(guó)家工業(yè)發(fā)展，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。 血紅素加氧酶（Heme oxygenase,HO）是一種微粒體酶，是血紅素降解的起始酶和限速酶，HO-1為其誘導(dǎo)型，近期研究數(shù)據(jù)表明，HO-1基因作為一種保護(hù)性基因，其過(guò)表達(dá)有重要的生物學(xué)效應(yīng)比如，抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗惡性細(xì)胞增生、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期活性以及對(duì)Treg細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，HO-1對(duì)變應(yīng)性鼻炎具有保護(hù)作用。 目前變應(yīng)性鼻炎的治療多采用激素類(lèi)藥物，不良反應(yīng)多，烏司他丁源于人體，不良反應(yīng)少，臨床上已廣泛應(yīng)用于胰腺炎、休克、全身炎癥反應(yīng)等的治療，效果顯著。烏司他丁能抑制炎癥介質(zhì)過(guò)度釋放，改善微循環(huán)、組織灌注，抑制組織細(xì)胞凋亡，同時(shí)可穩(wěn)定細(xì)胞膜，抑制蛋白質(zhì)分解代謝亢進(jìn)，清除體內(nèi)氧自由基，抑制IL-6、IL-8的過(guò)度生成及ICAM-1的表達(dá)等作用，但是該藥物在變應(yīng)性鼻炎中尚未應(yīng)用，在變應(yīng)性炎癥中的具體作用及機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。 鑒于HO-1與烏司他丁均具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，因此本實(shí)驗(yàn)即通過(guò)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)，探討烏司他丁在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病過(guò)程中對(duì)小鼠及肥大細(xì)胞中HO-1蛋白含量表達(dá)的影響，并與激素類(lèi)藥物相比較，烏司他丁是否通過(guò)誘導(dǎo)HO-1上調(diào)，達(dá)到治療作用，為進(jìn)一步闡述烏司他丁及HO-1在治療變應(yīng)性鼻炎中的機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法：40只FVB系SPF級(jí)小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（con）、AR模型組（OVA）、地塞米松干預(yù)組（OVA+Dex）、烏司他丁干預(yù)組（OVA+UTI），AR模型組采用10%卵清蛋白（ovalbumin，OVA）進(jìn)行致敏，建立變應(yīng)性鼻炎小鼠模型，地塞米松干預(yù)組和烏司他丁干預(yù)組局部激發(fā)前腹腔注射地塞米松及烏司他丁。行為學(xué)觀察對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。末次激發(fā)后麻醉、取血，用ELISA法測(cè)定血清中IL-4、INF-γ、OVA特異性IgE含量；收集鼻腔灌洗液（Nasal lavage fluid，NLF），用于炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)；用Western Blot法測(cè)定肺組織HO-1的蛋白含量；鼻組織固定、包埋，行HE染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察鼻組織粘膜形態(tài)學(xué)改變和HO-1蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)體外培養(yǎng)小鼠肥大細(xì)胞分為正常組（con）、炎癥模型組（TNF-α組）、地塞米松干預(yù)組（TNF-α+Dex）、烏司他丁干預(yù)組（TNF-α+UTI），收集上清液檢測(cè)類(lèi)胰蛋白酶活力，收集細(xì)胞分別行免疫熒光、ROS檢測(cè)、Westernblot、RT-PCR對(duì)烏司他丁在肥大細(xì)胞炎癥模型中的作用以及HO-1蛋白在各組肥大細(xì)胞中的表達(dá)情況進(jìn)行比較，并探討在肥大細(xì)胞中HO-1對(duì)烏司他丁是否存在時(shí)間及劑量依賴性。 結(jié)果： 1烏司他丁可以明顯改善變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻部癥狀。 AR模型組中10只小鼠均建模成功，鼻部出現(xiàn)變應(yīng)性鼻炎典型的癥狀，行為學(xué)觀察疊加記分均5分；與AR組相比，地塞米松干預(yù)組、烏司他丁干預(yù)組癥狀明顯減輕，疊加記分均5分；對(duì)照組沒(méi)有變應(yīng)性鼻炎癥狀。 2烏司他丁對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠氣道粘膜有明顯的保護(hù)作用 空白對(duì)照組鼻黏膜層次分明，無(wú)明顯炎癥改變；AR組鼻黏膜可見(jiàn)不同程度水腫，少量上皮細(xì)胞剝脫，杯狀細(xì)胞體積大，腺體增生，黏膜下嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。地塞米松干預(yù)組及烏司他丁干預(yù)組上述改變明顯減輕。 3烏司他丁可以明顯抑制變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量 AR模型組中嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）數(shù)明顯增多，與其他三組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P㩳0.05）。地塞米松和烏司他丁干預(yù)后，嗜酸性粒細(xì)胞明顯下降但與空白對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P㩳0.05） 4烏司他丁可以逆轉(zhuǎn)變應(yīng)性鼻炎小鼠Th1/Th2細(xì)胞因子失衡。 AR組小鼠血清中IL-4、OVA特異性IgE、含量明顯高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.05），而空白對(duì)照組、地塞米松干預(yù)組和烏司他丁干預(yù)組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。IFN-γ在AR組小鼠血清中含量明顯低于其他三組，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P㩳0.05），而空白對(duì)照組、地塞米松干預(yù)組和烏司他丁干預(yù)組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 5烏司他丁可以明顯抑制TNF-α刺激后肥大細(xì)胞脫顆粒肥大細(xì)胞在給予TNF-α刺激后，類(lèi)胰蛋白酶活力明顯增強(qiáng)，明顯高于正常組、烏司他丁干預(yù)組和地塞米松干預(yù)組且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P㩳0.05），而正常組、烏司他丁干預(yù)組和地塞米松干預(yù)組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 6烏司他丁可以明顯抑制TNF-α刺激后肥大細(xì)胞中ROS的表達(dá) 肥大細(xì)胞正常組中ROS處于低表達(dá)狀態(tài)，給予TNF-α刺激后，ROS在肥大細(xì)胞中的表達(dá)明顯增加，當(dāng)給與地塞米松、烏司他丁干預(yù)后，ROS在肥大細(xì)胞中的表達(dá)明顯降低，但仍高于正常組。 7烏司他丁可以誘導(dǎo)變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻粘膜、肺組織以及肥大細(xì)胞中HO-1蛋白的表達(dá)。 空白對(duì)照組與其余三組相比，HO-1蛋白表達(dá)有有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），而AR模型組與地塞米松干預(yù)組、烏司他丁干預(yù)組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 8烏司他丁誘導(dǎo)肥大細(xì)胞HO-1蛋白和基因的表達(dá)呈時(shí)間及劑量依賴性 隨著烏司他丁干預(yù)的時(shí)間增加，HO-1在肥大細(xì)胞中的表達(dá)逐漸增加，在4小時(shí)明顯增加。烏司他丁干預(yù)4小時(shí)，隨著烏司他丁濃度的增加，HO-1表達(dá)逐漸增加。 結(jié)論： 1烏司他丁抑制小鼠氣道嗜酸性粒細(xì)胞增多，調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子失衡等免疫調(diào)節(jié)作用，與地塞米松相比，同樣具有免疫調(diào)節(jié)作用，但抗炎作用優(yōu)于地塞米松。 2烏司他丁對(duì)肥大細(xì)胞炎癥模型具有抑制肥大細(xì)胞脫顆粒、抗氧化應(yīng)激作用。 3烏司他丁明顯上調(diào)治療組小鼠模型相關(guān)組織HO-1蛋白的表達(dá)；明顯上調(diào)肥大細(xì)胞HO-1蛋白的表達(dá)，其誘導(dǎo)HO-1蛋白及基因表達(dá)的作用呈明顯時(shí)間以及劑量依賴性。 4綜上所述，烏司他丁有可能是通過(guò)上調(diào)HO-1表達(dá)而對(duì)變應(yīng)性鼻炎發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用。
【關(guān)鍵詞】：變應(yīng)性鼻炎 烏司他丁 血紅素加氧酶-1 活性氧自由基 肥大細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R765.21
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-37
• 附表37-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述 變應(yīng)性鼻炎相關(guān)細(xì)胞因子免疫機(jī)制研究進(jìn)展48-59
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：882614