經(jīng)角膜電刺激對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞活性影響的研究
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【摘要】:目的 探討經(jīng)角膜電刺激(transcorneal electrical stimulation, TES)對(duì)視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞(1etinal microglia cells, RMGs)活性及腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)表達(dá)的影響。 方法 研究TES對(duì)視神經(jīng)橫斷傷(optic nerve transection, ONT)后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells, RGCs)存活及RMGs活化的影響。以成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠為研究對(duì)象,將90只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分成以下3組:對(duì)照組(Control組);ONT+假刺激組(ONT+Sham組):ONT+TES組(()NT+TES組)。熒光金(fluorogold, FG)經(jīng)雙側(cè)上丘逆行標(biāo)記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs),7d后制作ONT模型。Control組只暴露視神經(jīng)但不切斷視神經(jīng);ONT+Sham組在術(shù)后Od、4d及0d、4d、7d、10d給予假性TES; ONT+TES組在術(shù)后0d、4d及0d、4d、7d、10d給予TES。上述各組在術(shù)后7d及14d運(yùn)用視網(wǎng)膜鋪片及免疫熒光技術(shù)行RGCs及RMGs計(jì)數(shù);應(yīng)用熒光雙標(biāo)染色法檢測(cè)TNF-α與RMGs是否共同表達(dá);同時(shí)對(duì)術(shù)后7d及14d各組大鼠視網(wǎng)膜TNF-α的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果 與Control組比較,ONT后7d及14d視網(wǎng)膜的RGCs數(shù)量顯著減少,RMGs數(shù)量顯著增多,且RMGs由靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)。ONT后7d及14d, ONT+TES組存活的RGCs數(shù)顯著高于ONT+Sham組;ONT后7d,ONT+TES組活化的RMGs數(shù)及阿米巴樣的RMGs數(shù)顯著低于ONT+Sham組:ONT后14d,ONT+TES組活化的RMGs數(shù)與ONT+Sham組相比無(wú)明顯差異,但是其阿米巴樣的RMGs數(shù)顯著低于ONT+Sham組。免疫熒光雙標(biāo)染色顯示ONT后7d,TNF-α表達(dá)于阿米巴樣的IMGs中;ONT后14d,TNF-α表達(dá)于所有類(lèi)型的RMGs中。與Control組比較,ONT后7d及14d視網(wǎng)膜的TNF-α的表達(dá)顯著增加,而()NT+TES組TNF-α的表達(dá)明顯低于ONT+Sham組。 結(jié)論 我們的研究發(fā)現(xiàn)視神經(jīng)損傷會(huì)激活RMGs,增加促炎因子TNF-α的表達(dá)。TES可能通過(guò)抑制神經(jīng)損傷后RMGs的增殖活化,降低TNF-α的表達(dá),進(jìn)而減輕RGCs的凋亡,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】:視神經(jīng)損傷 經(jīng)角膜電刺激 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞 腫瘤壞死因子-α
【學(xué)位授予單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類(lèi)號(hào)】:R774.1
【目錄】:
- 致謝4-6
- 中文摘要6-8
- Abstract8-11
- 縮略詞表(abbreviaet)11-12
- 目錄12-14
- 1 前言14-16
- 2 材料和方法16-22
- 2.1 材料和主要設(shè)備16-17
- 2.2 動(dòng)物分組17
- 2.3 熒光金(FG)逆行示蹤標(biāo)記RGCs17
- 2.4 視神經(jīng)橫斷傷(OPTIC NERVE TRANSECTION,ONT)模型的建立17-18
- 2.5 經(jīng)角膜電刺激(TES)的實(shí)施18
- 2.6 標(biāo)本的處理18-19
- 2.7 免疫熒光染色和視網(wǎng)膜鋪片19
- 2.8 激光共聚焦顯微鏡拍照及RGCs和RMGs計(jì)數(shù)19-20
- 2.9 WESTERN BLOT免疫印跡分析20-21
- 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21-22
- 3 結(jié)果22-31
- 3.1 TES提高ONT后RGCs的存活率22-25
- 3.2 TES減少ONT后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(GANGLION CELLLAYER,GCL)RMGs的活化25-27
- 3.3 ONT后TNF-A在視網(wǎng)膜GCL層中主要定位于RMGs且表達(dá)增加,TES能夠抑制ONT后TNF-A的表達(dá)27-31
- 4 討論31-36
- 參考文獻(xiàn)36-41
- 綜述41-53
- 參考文獻(xiàn)47-53
- 作者簡(jiǎn)歷及在讀期間所取得的科研成果53
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本文編號(hào):874224
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