本文關(guān)鍵詞：PAX3對靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的實驗研究

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【摘要】：目的探討配對盒基因(pair box 3,PAX3)突變對小眼球畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響及其在I型Waardenburg綜合征(Waardenburg syndrome,WS)發(fā)病中的作用。方法野生型PAX3及其致病突變H80D和H186fsX5表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞,應(yīng)用熒光素酶活性檢測系統(tǒng)對MITF報告基因活性檢測,觀察野生/突變PAX3蛋白對其靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控作用及二個突變蛋白對野生PAX3蛋白功能的影響;應(yīng)用生物素標(biāo)記的含序列attaat的DNA寡核苷酸鏈探針分別沉淀PAX3、H80D和H186fsX5蛋白,檢測野生/突變PAX3蛋白與靶基因MITF啟動子的結(jié)合力。結(jié)果盡管H80D蛋白仍殘余部分功能可增加MITF啟動子轉(zhuǎn)錄活性,但與野生PAX3蛋白相比,二者差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),而H186fsX5蛋白則完全失去調(diào)控MITF啟動子轉(zhuǎn)錄活性作用(P0.01);二者均未對野生PAX3蛋白功能產(chǎn)生顯性負效應(yīng)作用(P0.05)。突變H80D蛋白與野生PAX3蛋白均可與MITF啟動子特異DNA序列attaat結(jié)合,而突變H186fsX5蛋白則不能與之結(jié)合。結(jié)論 H80D和H186fsX5影響靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性,使其表達下調(diào)、黑色素合成減少,以單倍體劑量不足效應(yīng)致I型WS。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟醫(yī)院耳鼻咽喉科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;新疆昌吉州中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【關(guān)鍵詞】： Waardenburg綜合征 配對盒基因 基因突變 小眼球畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81260160)資助
【分類號】：R77
【正文快照】： 配對盒基因(pair　box　3,PAX3)在脊椎動物高司;DMEM、FBS、Pen　Strep、Opti-MEM、胰酶購度保守,是神經(jīng)嵴(neural　crest,NC)發(fā)育的主要調(diào)自美國Gibco公司;Protease　inhibitor　cocktail、單控因子之一,NC是由起源于背神經(jīng)管的多潛能細克隆鼠抗Flag抗體、TWEEN-20、辣根過氧

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本文編號：836404