本文關鍵詞：miR-137對人喉癌細胞株Hep-2細胞增殖的影響

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【摘要】：背景與目的： 微小RNA(microRNAs，miRNA)是一類大小為20～25個核苷酸(nucleotide，nt)的非編碼小RNA。成熟的miRNA與其靶信使RNA（messenger RNA，mRNA）的3’端UTR完全或不完全配對后，通過切割或抑制靶mRNA的轉錄后翻譯，參與調節(jié)生物的發(fā)育、細胞的分化、增殖和凋亡等。近年來諸多研究表明miRNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切，某些miRNA在喉癌中呈特異性表達[12]。在前期工作中我們利用芯片技術，借助于我科豐富的人喉癌標本庫，研究人類WHO各種組織病理分型的喉癌、正常人喉組織及喉癌細胞系中miRNAs表達譜，找到人喉癌中特異性表達的miRNAs，miR-137就是其中之一。miR-137作為一個抑癌性微小RNA，已經(jīng)被證實在多種腫瘤組織中呈低表達[3]。本研究通過升高miR-137在喉癌細胞中的表達，觀察其對人喉癌瘤細胞Hep-2細胞生物學特征的影響，并且通過對其下游靶基因的研究，闡述miR-137在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，從而為miR-137能夠作為喉癌診斷和治療靶點提供依據(jù)。 研究方法： 1．選取對數(shù)生長期的Hep-2細胞，實驗分為反義組(轉染miR-137)，無義序列組（轉染Scramble）和空白對照組(Blank)，通過MTT實驗和流式細胞術觀察特異性升高miR-137表達后對Hep-2細胞增殖、周期及凋亡的影響。 2．構建CDC42siRNA慢病毒載體，將實驗分為CDC42小干擾RNA組(感染CDC42siRNA)，陰性對照組（感染negative control siRNA，CDC42NC）和空白對照組(Blank)，并通過MTT實驗、流式細胞技術研究CDC42siRNA對Hep-2細胞的增殖、細胞周期及細胞凋亡的影響。 3．同時應用Western blot法和RT-PCR法研究轉染miR-137后喉癌細胞中CDC42的表達量的變化。 研究結果： 1． miR-137寡聚核苷酸能夠有效升高喉癌Hep-2細胞miR-137表達，顯著降低喉癌細胞增殖能力，誘導細胞阻滯在G1/G0期，促使細胞凋亡明顯增加。 2．慢病毒介導的CDC42siRNA感染Hep-2細胞，發(fā)現(xiàn)CDC42siRNA抑制喉癌細胞增殖，促使喉癌細胞阻滯在G1/G0期，并誘導其凋亡。寡聚核苷酸miR-137能夠在蛋白水平及mRNA水平明顯下調Hep-2細胞中CDC42的表達。 研究結論： 1． miR-137寡聚核苷酸能夠在體內外顯著抑制喉癌細胞生長，誘導細胞阻滯在G1/G0期，促使細胞凋亡明顯增加。miR-137能夠下調CDC42的表達。喉癌中異常表達的miR-137可能發(fā)揮著抗凋亡因子作用。 2．慢病毒介導的CDC42siRNA感染Hep-2細胞，發(fā)現(xiàn)CDC42siRNA抑制喉癌細胞增殖，促使喉癌細胞阻滯在G1/G0期，并誘導其凋亡。 3. miR-137可能通過調節(jié)CDC42的表達，，影響喉癌細胞Hep-2的增殖水平及細胞周期進展。
【關鍵詞】：喉癌 miR-137 CDC42
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 第一部分 喉癌細胞的培養(yǎng)、實驗16-20
• 材料與方法16-19
• 實驗材料16-17
• 實驗方法17-19
• 結果19-20
• 第二部分 miR-137 對人喉癌細胞株 Hep-2 細胞增殖的影響20-32
• 資料和方法20-29
• 實驗材料20-21
• 實驗方法21-29
• 結果29-32
• 第三部分 重組慢病毒載體構建、鑒定、轉染32-41
• 材料與方法34-39
• 實驗材料34-35
• 實驗方法35-39
• 結果39-41
• 討論41-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-49
• 綜述49-58
• 參考文獻54-58
• 碩士學習期間發(fā)表文章58-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 邱麗燕,王金福;骨髓間充質干細胞的研究進展[J];生物工程學報;2003年02期

本文編號：806410