本文關(guān)鍵詞：miR-137對人喉癌細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：背景與目的： 微小RNA(microRNAs，miRNA)是一類大小為20～25個核苷酸(nucleotide，nt)的非編碼小RNA。成熟的miRNA與其靶信使RNA（messenger RNA，mRNA）的3’端UTR完全或不完全配對后，通過切割或抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)錄后翻譯，參與調(diào)節(jié)生物的發(fā)育、細(xì)胞的分化、增殖和凋亡等。近年來諸多研究表明miRNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，某些miRNA在喉癌中呈特異性表達(dá)[12]。在前期工作中我們利用芯片技術(shù)，借助于我科豐富的人喉癌標(biāo)本庫，研究人類WHO各種組織病理分型的喉癌、正常人喉組織及喉癌細(xì)胞系中miRNAs表達(dá)譜，找到人喉癌中特異性表達(dá)的miRNAs，miR-137就是其中之一。miR-137作為一個抑癌性微小RNA，已經(jīng)被證實在多種腫瘤組織中呈低表達(dá)[3]。本研究通過升高miR-137在喉癌細(xì)胞中的表達(dá)，觀察其對人喉癌瘤細(xì)胞Hep-2細(xì)胞生物學(xué)特征的影響，并且通過對其下游靶基因的研究，闡述miR-137在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，從而為miR-137能夠作為喉癌診斷和治療靶點提供依據(jù)。 研究方法： 1．選取對數(shù)生長期的Hep-2細(xì)胞，實驗分為反義組(轉(zhuǎn)染miR-137)，無義序列組（轉(zhuǎn)染Scramble）和空白對照組(Blank)，通過MTT實驗和流式細(xì)胞術(shù)觀察特異性升高miR-137表達(dá)后對Hep-2細(xì)胞增殖、周期及凋亡的影響。 2．構(gòu)建CDC42siRNA慢病毒載體，將實驗分為CDC42小干擾RNA組(感染CDC42siRNA)，陰性對照組（感染negative control siRNA，CDC42NC）和空白對照組(Blank)，并通過MTT實驗、流式細(xì)胞技術(shù)研究CDC42siRNA對Hep-2細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。 3．同時應(yīng)用Western blot法和RT-PCR法研究轉(zhuǎn)染miR-137后喉癌細(xì)胞中CDC42的表達(dá)量的變化。 研究結(jié)果： 1． miR-137寡聚核苷酸能夠有效升高喉癌Hep-2細(xì)胞miR-137表達(dá)，顯著降低喉癌細(xì)胞增殖能力，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯在G1/G0期，促使細(xì)胞凋亡明顯增加。 2．慢病毒介導(dǎo)的CDC42siRNA感染Hep-2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)CDC42siRNA抑制喉癌細(xì)胞增殖，促使喉癌細(xì)胞阻滯在G1/G0期，并誘導(dǎo)其凋亡。寡聚核苷酸miR-137能夠在蛋白水平及mRNA水平明顯下調(diào)Hep-2細(xì)胞中CDC42的表達(dá)。 研究結(jié)論： 1． miR-137寡聚核苷酸能夠在體內(nèi)外顯著抑制喉癌細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯在G1/G0期，促使細(xì)胞凋亡明顯增加。miR-137能夠下調(diào)CDC42的表達(dá)。喉癌中異常表達(dá)的miR-137可能發(fā)揮著抗凋亡因子作用。 2．慢病毒介導(dǎo)的CDC42siRNA感染Hep-2細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)CDC42siRNA抑制喉癌細(xì)胞增殖，促使喉癌細(xì)胞阻滯在G1/G0期，并誘導(dǎo)其凋亡。 3. miR-137可能通過調(diào)節(jié)CDC42的表達(dá)，，影響喉癌細(xì)胞Hep-2的增殖水平及細(xì)胞周期進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：喉癌 miR-137 CDC42
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 第一部分 喉癌細(xì)胞的培養(yǎng)、實驗16-20
• 材料與方法16-19
• 實驗材料16-17
• 實驗方法17-19
• 結(jié)果19-20
• 第二部分 miR-137 對人喉癌細(xì)胞株 Hep-2 細(xì)胞增殖的影響20-32
• 資料和方法20-29
• 實驗材料20-21
• 實驗方法21-29
• 結(jié)果29-32
• 第三部分 重組慢病毒載體構(gòu)建、鑒定、轉(zhuǎn)染32-41
• 材料與方法34-39
• 實驗材料34-35
• 實驗方法35-39
• 結(jié)果39-41
• 討論41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 綜述49-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 碩士學(xué)習(xí)期間發(fā)表文章58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 邱麗燕,王金福;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];生物工程學(xué)報;2003年02期

本文編號：806410