本文關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞移植后遷徙分化及對(duì)視功能保護(hù)作用初步研究

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【摘要】：研究背景和目的： 視神經(jīng)損傷是常見(jiàn)眼外傷，可導(dǎo)致視力障礙甚至失明，目前仍缺乏有效的臨床治療手段。近幾年來(lái)，細(xì)胞移植使人們看到了視神經(jīng)損傷修復(fù)研究的希望，但細(xì)胞移植仍然面臨許多問(wèn)題。首先干細(xì)胞具有多向分化潛能，分化具有不確定性，移植后RGCs分化率較低。其次移植細(xì)胞向損傷區(qū)域的遷徙是干細(xì)胞治療面臨的第二個(gè)問(wèn)題�；|(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(Stromal-derived factor，SDF-1)可與細(xì)胞表面的CXCR4結(jié)合，活化下游G蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞遷移[1]，而CXCR4特異性抑制劑AMD3100可以阻斷這種細(xì)胞趨化作用。本課題小組前期研究發(fā)現(xiàn)，體外定向誘導(dǎo)RSCs向RGCs分化3d時(shí)，細(xì)胞既保留了干細(xì)胞的增殖和分化能力，同時(shí)具有了向RGCs定向分化能力，我們認(rèn)為這群RSCs向RGCs分化的中間細(xì)胞為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞(Retinal ganglion progenitor cells,RGPCs)，其可能成為理想的種子細(xì)胞用于視神經(jīng)損傷的細(xì)胞移植治療。同時(shí)，體外研究發(fā)現(xiàn)，SDF-1對(duì)RGPCs具有趨化作用，而AMD3100可以阻斷這種作用。在本課題中，將重點(diǎn)研究：1、視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織中的SDF-1及其受體CXCR4的表達(dá)規(guī)律；2、視神經(jīng)損傷大鼠RGPCs移植后對(duì)視功能的保護(hù)作用及自身視網(wǎng)膜中SDF-1對(duì)移植細(xì)胞遷徙的影響。 方法： 1、RSCs的原代培養(yǎng) 2、RSCs向RGPCs的定向誘導(dǎo)分化，獲取RGPCs 3、免疫熒光染色及Western Blot檢測(cè)視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜組織中SDF-1及CXCR4定位及定量表達(dá) 4、通過(guò)RGCs計(jì)數(shù)及電生理檢測(cè)RGPCs移植后對(duì)視神經(jīng)損傷大鼠視功能的保護(hù)作用 結(jié)果： 1、RSCs的培養(yǎng)及鑒定： RSCs形成克隆球，懸浮生長(zhǎng)；RSCs陽(yáng)性表達(dá)Nestin、Ki67及Chx10，部分細(xì)胞表達(dá)Math5，而B(niǎo)rn3b不表達(dá)。 2、RSCs向RGPCs的定向誘導(dǎo)分化及鑒定：RGPCs貼壁生長(zhǎng)，RGPCs陽(yáng)性表達(dá)Nestin、 Ki67，部分細(xì)胞表達(dá)Math5及Brn3b，而Thy1.1陰性。 3、視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜組織中SDF-1及CXCR4表達(dá)規(guī)律：視神經(jīng)損傷后大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層及外叢狀層可見(jiàn)SDF-1表達(dá)，表達(dá)隨損傷時(shí)間出現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，并與GFAP共表達(dá)。 4、RGPCs對(duì)視神經(jīng)損傷大鼠視功能的保護(hù)作用：視神經(jīng)損傷大鼠玻璃體腔移植RGPCs后分別于移植后30天、60天熒光顯微鏡檢測(cè)少量RGPCs細(xì)胞遷移至視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層；PBS組及RGPCs組較正常組RGCs明顯減少，而PBS組較RGPCs組RGCs也明顯減少；F-vep檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PBS組及RGPCs組較正常組P波潛伏期明顯延長(zhǎng)，，幅值明顯下降，而PBS組較RGPCs組P波潛伏期明顯延長(zhǎng)，幅值明顯下降。 結(jié)論： 1、RGPCs同時(shí)具有一定干細(xì)胞增殖特性及向RGCs定向分化能力，可成為細(xì)胞移植治療視神經(jīng)損傷理想的種子細(xì)胞。 2、視神經(jīng)損傷后，視網(wǎng)膜中SDF-1定位表達(dá)在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及外叢狀層的星形膠質(zhì)細(xì)胞及Müller細(xì)胞，且與GFAP共表達(dá)，而表達(dá)量隨損傷時(shí)間出現(xiàn)先增高后降低，SDF-1表達(dá)上調(diào)可能與膠質(zhì)細(xì)胞活化相關(guān)。 3、視神經(jīng)損傷大鼠RGPCs玻璃體腔移植后，部分能向視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層遷移并分化為RGCs，電生理F-VEP顯示P波波峰及潛伏期較損傷組明顯改善， RGCs存活率提高，表明RGPCs移植對(duì)RGCs及視功能具有保護(hù)作用，而視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜SDF-1升高對(duì)移植細(xì)胞的遷移無(wú)明顯作用。
【關(guān)鍵詞】：RSCs RGPCs SDF-1 細(xì)胞移植
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R774.6
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)詞表5-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-13
• 1.1 視神經(jīng)損傷導(dǎo)致視功能障礙10
• 1.2 細(xì)胞移植治療視神經(jīng)損傷仍然面臨許多問(wèn)題10-11
• 1.3 干細(xì)胞移植為視神經(jīng)損傷的治療帶來(lái)希望11
• 1.4 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞移植后的遷徙分化及對(duì)視功能保護(hù)作用11-12
• 1.5 視神經(jīng)損傷大鼠 RGPCs 玻璃體腔移植后對(duì)視功能保護(hù)研究的方法12-13
• 第二章 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞的獲取及鑒定13-22
• 2.1 前言13
• 2.2 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞的獲取及鑒定13-19
• 2.2.1 材料和方法13-15
• 2.2.2 結(jié)果15-19
• 2.3 討論19-20
• 2.4 小結(jié)20-22
• 第三章 大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜 SDF-1 及 CXCR4 的表達(dá)變化規(guī)律22-33
• 3.1 前言22
• 3.2 大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜 SDF-1 及 CXCR4 的表達(dá)變化規(guī)律22-30
• 3.2.1 材料和方法22-25
• 3.2.2 結(jié)果25-30
• 3.3 討論30-32
• 3.4 小結(jié)32-33
• 第四章 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞移植后遷移分化及對(duì)視功能保護(hù)作用的初步研究33-47
• 4.1 前言33
• 4.2 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)祖細(xì)胞移植后遷移分化及對(duì)視功能保護(hù)作用的初步研究33-44
• 4.2.1 材料和方法33-36
• 4.2.2 結(jié)果36-44
• 4.3 討論44-45
• 4.4 小結(jié)45-47
• 全文結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 文獻(xiàn)綜述 干細(xì)胞治療視網(wǎng)膜疾病新進(jìn)展51-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 在讀碩士學(xué)位期間取得的成果62-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：784494