本文關鍵詞：電針耳穴對年齡相關性聾豚鼠聽覺中樞蛋白質(zhì)組影響的初步研究

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【摘要】：目的:建立D-半乳糖年齡相關性聾豚鼠模型，探討電針耳穴對D-半乳糖所致的年齡相關性聾豚鼠聽覺中樞蛋白質(zhì)組的影響。方法:1.分組及模型建立：成年豚鼠30只，按隨機數(shù)字表法分成三組：D-半乳糖模型組10只，D-半乳糖+電針組10只，，對照組10只，18月齡豚鼠10只作為自然老化組。D-半乳糖模型組予以D-半乳糖（300mg/kg·day）頸背部皮下注射，每天1次，共六周；對照組予以等量生理鹽水頸背部皮下注射，每天1次，連續(xù)6周；D-半乳糖+電針組予以D-半乳糖（300mg/kg·day）頸背部皮下注射，每日1次，半小時后予以電針聽宮穴、翳風穴治療15分鐘，每日1次，連續(xù)6周。18月齡組豚鼠常規(guī)飼養(yǎng)。2.聽力學檢測：實驗結束后各組進行聽性腦干反應（Auditory brainstem response, ABR）和多頻穩(wěn)態(tài)誘發(fā)電位（Auditory steady state response, ASSR）檢測。3.聽皮層蛋白質(zhì)組圖譜建立及差異蛋白的鑒定：用常規(guī)細胞裂解法裂解細胞提取蛋白，Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度。對照組、D-半乳糖模型組和D-半乳糖+電針組三組豚鼠聽皮層進行雙向電泳（Two-dimensionalelectrophoresis,2-DE）。第一向采用pH4-7的固相pH梯度等電聚焦，第二向采用濃度為10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳�？既静⒄掌@得雙向電泳圖譜，篩選出10個具有差異表達的蛋白斑點。切取蛋白質(zhì)斑點，應用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時間質(zhì)譜技術（Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）進行檢測，獲得各蛋白質(zhì)的肽指紋圖譜，結合2-DE圖譜中各蛋白質(zhì)點的等電點（Isoelectric point, PI）和分子量（Molecular weight, MW）值，利用Mascot軟件進行匹配檢索NCBI數(shù)據(jù)庫來鑒定蛋白質(zhì)。4.聽皮層及下丘兒茶酚氧位甲基轉移酶（Catechol-0-methyltransferase, COMT）、β-鏈蛋白（β-catenin）表達的研究：采用蛋白質(zhì)印跡（Western blot）方法測定對照組、D-半乳糖模型組、D-半乳糖+電針組和18月齡組豚鼠聽皮層及下丘COMT、β-catenin蛋白表達變化情況。5.統(tǒng)計學方法：采用SPSS13.0軟件進行分析，運用單因素方差分析檢驗，P0.05具有統(tǒng)計學意義。結果：1.體重變化：對照組、D-半乳糖模型組和D-半乳糖+電針組三組豚鼠實驗前體重、實驗后體重差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。2.ABR閾值變化：聲強為132dB SPL、120dB SPL時，各組ABR Ⅲ波潛伏期比較：對照組和D-半乳糖模型組、對照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)，而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。3. ASSR閾值變化：比較各組ASSR閾值在1kHz、2kHz、4kHz時的變化，只有在4kHz時，對照組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），余各組之間差異均無統(tǒng)計學意義（P0.05）。4.聽皮層差異表達蛋白質(zhì)：灰度差異大于2倍以上的10個蛋白斑點鑒定出的蛋白質(zhì)分別是鳥嘌呤脫氨酶、ATP合酶β亞基、磷酸丙糖異構酶、肌酸激酶、丙酮酸脫氫酶E1復合體β亞基、α-烯醇化酶、磷酸甘油酸酯激酶-1、β-2A鏈樣微管蛋白等8種蛋白。5.聽皮層、下丘β-catenin蛋白表達變化：豚鼠聽皮層、下丘β-catenin蛋白表達量在D-半乳糖模型和18月齡組下降，D-半乳糖+電針組表達量增加。對照組和D-半乳糖模型組、對照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。6.聽皮層、下丘COMT蛋白表達變化：（1）聽皮層：COMT蛋白在D-半乳糖模型組和18月齡組表達降低，D-半乳糖+電針組表達增加。對照組和D-半乳糖模型組、對照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間COMT蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。（2）下丘：COMT蛋白在D-半乳糖模型組和18月齡組表達降低，D-半乳糖+電針組表達增加。對照組和D-半乳糖模型組、對照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間COMT蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。結論：1. D-半乳糖300mg/kg·day頸背部皮下注射6周可以建立年齡相關性聾豚鼠模型。2.電針聽宮穴、翳風穴能延緩豚鼠年齡相關性聾的發(fā)生。3.鳥嘌呤脫氨酶等蛋白質(zhì)可能參與了D-半乳糖致豚鼠年齡相關性聾的發(fā)生和發(fā)展過程，電針聽宮穴、翳風穴也可能通過調(diào)整以上蛋白質(zhì)的表達來延緩年齡相關性聾的發(fā)生和發(fā)展。4. β-catenin蛋白可能通過Wnt/β-catenin信號通路，調(diào)控細胞生長、分化及凋亡，參與聽覺中樞的老化過程。電針聽宮穴、翳風穴可能通過增加β-catenin蛋白表達，通過Wnt/β-catenin信號通路延緩豚鼠年齡相關性聾的發(fā)生。5.COMT蛋白可能通過調(diào)節(jié)兒茶酚胺的代謝，參與聽覺中樞的老化過程。電針聽宮穴、翳風穴可能通過增加COMT蛋白表達，提高兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，從而延緩豚鼠年齡相關性聾的發(fā)生。
【關鍵詞】：蛋白質(zhì)組 電針 年齡相關性聾 聽覺中樞 β-鏈蛋白 兒茶酚氧位甲基轉移酶
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R764.436
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-12
• 前言12-16
• 材料與方法16-28
• 結果28-43
• 討論43-55
• 結論55-56
• 參考文獻56-70
• 英漢縮略詞對照表70-71
• 致謝71-73
• 綜述73-86
• 參考文獻81-86

【參考文獻】

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本文編號：710773