本文關(guān)鍵詞：電針耳穴對(duì)年齡相關(guān)性聾豚鼠聽(tīng)覺(jué)中樞蛋白質(zhì)組影響的初步研究

  更多相關(guān)文章： 蛋白質(zhì)組 電針 年齡相關(guān)性聾 聽(tīng)覺(jué)中樞 β-鏈蛋白 兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶

【摘要】：目的:建立D-半乳糖年齡相關(guān)性聾豚鼠模型，探討電針耳穴對(duì)D-半乳糖所致的年齡相關(guān)性聾豚鼠聽(tīng)覺(jué)中樞蛋白質(zhì)組的影響。方法:1.分組及模型建立：成年豚鼠30只，按隨機(jī)數(shù)字表法分成三組：D-半乳糖模型組10只，D-半乳糖+電針組10只，，對(duì)照組10只，18月齡豚鼠10只作為自然老化組。D-半乳糖模型組予以D-半乳糖（300mg/kg·day）頸背部皮下注射，每天1次，共六周；對(duì)照組予以等量生理鹽水頸背部皮下注射，每天1次，連續(xù)6周；D-半乳糖+電針組予以D-半乳糖（300mg/kg·day）頸背部皮下注射，每日1次，半小時(shí)后予以電針聽(tīng)宮穴、翳風(fēng)穴治療15分鐘，每日1次，連續(xù)6周。18月齡組豚鼠常規(guī)飼養(yǎng)。2.聽(tīng)力學(xué)檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng)（Auditory brainstem response, ABR）和多頻穩(wěn)態(tài)誘發(fā)電位（Auditory steady state response, ASSR）檢測(cè)。3.聽(tīng)皮層蛋白質(zhì)組圖譜建立及差異蛋白的鑒定：用常規(guī)細(xì)胞裂解法裂解細(xì)胞提取蛋白，Bradford法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。對(duì)照組、D-半乳糖模型組和D-半乳糖+電針組三組豚鼠聽(tīng)皮層進(jìn)行雙向電泳（Two-dimensionalelectrophoresis,2-DE）。第一向采用pH4-7的固相pH梯度等電聚焦，第二向采用濃度為10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。考染并照片獲得雙向電泳圖譜，篩選出10個(gè)具有差異表達(dá)的蛋白斑點(diǎn)。切取蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）進(jìn)行檢測(cè)，獲得各蛋白質(zhì)的肽指紋圖譜，結(jié)合2-DE圖譜中各蛋白質(zhì)點(diǎn)的等電點(diǎn)（Isoelectric point, PI）和分子量（Molecular weight, MW）值，利用Mascot軟件進(jìn)行匹配檢索NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)鑒定蛋白質(zhì)。4.聽(tīng)皮層及下丘兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶（Catechol-0-methyltransferase, COMT）、β-鏈蛋白（β-catenin）表達(dá)的研究：采用蛋白質(zhì)印跡（Western blot）方法測(cè)定對(duì)照組、D-半乳糖模型組、D-半乳糖+電針組和18月齡組豚鼠聽(tīng)皮層及下丘COMT、β-catenin蛋白表達(dá)變化情況。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，運(yùn)用單因素方差分析檢驗(yàn)，P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.體重變化：對(duì)照組、D-半乳糖模型組和D-半乳糖+電針組三組豚鼠實(shí)驗(yàn)前體重、實(shí)驗(yàn)后體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。2.ABR閾值變化：聲強(qiáng)為132dB SPL、120dB SPL時(shí)，各組ABR Ⅲ波潛伏期比較：對(duì)照組和D-半乳糖模型組、對(duì)照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。3. ASSR閾值變化：比較各組ASSR閾值在1kHz、2kHz、4kHz時(shí)的變化，只有在4kHz時(shí)，對(duì)照組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），余各組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。4.聽(tīng)皮層差異表達(dá)蛋白質(zhì)：灰度差異大于2倍以上的10個(gè)蛋白斑點(diǎn)鑒定出的蛋白質(zhì)分別是鳥(niǎo)嘌呤脫氨酶、ATP合酶β亞基、磷酸丙糖異構(gòu)酶、肌酸激酶、丙酮酸脫氫酶E1復(fù)合體β亞基、α-烯醇化酶、磷酸甘油酸酯激酶-1、β-2A鏈樣微管蛋白等8種蛋白。5.聽(tīng)皮層、下丘β-catenin蛋白表達(dá)變化：豚鼠聽(tīng)皮層、下丘β-catenin蛋白表達(dá)量在D-半乳糖模型和18月齡組下降，D-半乳糖+電針組表達(dá)量增加。對(duì)照組和D-半乳糖模型組、對(duì)照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。6.聽(tīng)皮層、下丘COMT蛋白表達(dá)變化：（1）聽(tīng)皮層：COMT蛋白在D-半乳糖模型組和18月齡組表達(dá)降低，D-半乳糖+電針組表達(dá)增加。對(duì)照組和D-半乳糖模型組、對(duì)照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間COMT蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而D-半乳糖模型組和18月齡組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（2）下丘：COMT蛋白在D-半乳糖模型組和18月齡組表達(dá)降低，D-半乳糖+電針組表達(dá)增加。對(duì)照組和D-半乳糖模型組、對(duì)照組和18月齡組、D-半乳糖+電針組和D-半乳糖模型組之間COMT蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論：1. D-半乳糖300mg/kg·day頸背部皮下注射6周可以建立年齡相關(guān)性聾豚鼠模型。2.電針聽(tīng)宮穴、翳風(fēng)穴能延緩豚鼠年齡相關(guān)性聾的發(fā)生。3.鳥(niǎo)嘌呤脫氨酶等蛋白質(zhì)可能參與了D-半乳糖致豚鼠年齡相關(guān)性聾的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，電針聽(tīng)宮穴、翳風(fēng)穴也可能通過(guò)調(diào)整以上蛋白質(zhì)的表達(dá)來(lái)延緩年齡相關(guān)性聾的發(fā)生和發(fā)展。4. β-catenin蛋白可能通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及凋亡，參與聽(tīng)覺(jué)中樞的老化過(guò)程。電針聽(tīng)宮穴、翳風(fēng)穴可能通過(guò)增加β-catenin蛋白表達(dá)，通過(guò)Wnt/β-catenin信號(hào)通路延緩豚鼠年齡相關(guān)性聾的發(fā)生。5.COMT蛋白可能通過(guò)調(diào)節(jié)兒茶酚胺的代謝，參與聽(tīng)覺(jué)中樞的老化過(guò)程。電針聽(tīng)宮穴、翳風(fēng)穴可能通過(guò)增加COMT蛋白表達(dá)，提高兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，從而延緩豚鼠年齡相關(guān)性聾的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：蛋白質(zhì)組 電針 年齡相關(guān)性聾 聽(tīng)覺(jué)中樞 β-鏈蛋白 兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R764.436
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-12
• 前言12-16
• 材料與方法16-28
• 結(jié)果28-43
• 討論43-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-70
• 英漢縮略詞對(duì)照表70-71
• 致謝71-73
• 綜述73-86
• 參考文獻(xiàn)81-86

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王陽(yáng)夢(mèng);董銀卯;何聰芬;;蛋白質(zhì)組學(xué)核心技術(shù)研究進(jìn)展[J];北京工商大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年04期

2 張建;胡遠(yuǎn)兵;楊忠;蔡文琴;;β-catenin在生后大鼠腦組織的表達(dá)及變化[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2006年02期

3 孟培燕;翳風(fēng)穴證治機(jī)理淺探[J];湖北中醫(yī)雜志;2001年08期

4 劉愛(ài)國(guó),王正敏,周梁;豚鼠顳骨顯微解剖學(xué)研究[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2003年03期

5 程凱;針刺小腸經(jīng)不同腧穴對(duì)聽(tīng)性腦干反應(yīng)影響的特異性研究[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

6 孔維佳;胡鈺娟;王瓊;許黎;王瑩;韓月臣;李雋;劉波;孔雯;;大鼠內(nèi)耳擬老化伴線粒體突變模型的建立[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;2006年19期

7 謝靜;羅凌惠;薛秋紅;李欣;龔樹(shù)生;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP78在擬老化大鼠耳蝸中變化的研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年01期

8 許黎;胡鈺娟;孔維佳;師洪;彭煒;胡媛;;內(nèi)耳擬老化大鼠模型對(duì)噪聲損傷易感性研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年19期

9 何歡;彭維杰;;β-catenin的研究進(jìn)展[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2010年10期

10 黃曉云,龔英;針刺翳風(fēng)穴治療面神經(jīng)炎33例[J];山西中醫(yī);2001年01期

本文編號(hào)：710773