本文關(guān)鍵詞：NF-κB在特發(fā)性眼眶炎性假瘤發(fā)病過程中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 特發(fā)性眼眶炎性假瘤（IOIP） NF-κB 炎癥

【摘要】：特發(fā)性眼眶炎性假瘤（Idiopathic Orbital Inflammatory Pseudotumor，IOIP）是一種常見的眼眶疾病，，由炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化反應(yīng)造成的損害，是一種軟組織腫瘤。因病因和發(fā)病機(jī)制不明，診斷與治療相當(dāng)困難，一直是眼科領(lǐng)域研究的重點(diǎn)難點(diǎn)之一，研究該病的發(fā)病機(jī)制顯得極為迫切。 核因子κB（nuclear factor-κB, NF-κB）是一類廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，能與多種細(xì)胞基因啟動(dòng)子或增強(qiáng)子序列特定位點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合而促進(jìn)轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答以及細(xì)胞的增生、轉(zhuǎn)化和凋亡等重要的病理生理過程密切相關(guān)。本研究通過收集臨床IOIP樣本，研究NF-κB在IOIP發(fā)病過程中的作用，主要完成了以下工作： 1．建立眼病標(biāo)本庫。收集臨床眼病相關(guān)樣本近200例，其中IOIP樣本約70例，病理樣本包括血樣和組織，血樣離心后將血漿與血細(xì)胞分離，血細(xì)胞用于提取血DNA用。組織一部分做石蠟切片后進(jìn)行HE染色，從而根據(jù)組織細(xì)胞類型將樣本分類。剩余組織用于提取蛋白質(zhì)，RNA及做原代細(xì)胞培養(yǎng)，以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本庫的建立為IOIP的研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，具有重要意義。 2．采用免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光化學(xué)、Western blot及real-timeRT-PCR等方法研究IOIP樣本中NF-κB亞單位p50和p65，阻遏物IκB，IκBζ及磷酸化的p65（p-p65）的表達(dá)情況，并采用表達(dá)譜芯片研究NF-κB相關(guān)基因的表達(dá)情況和懸浮芯片系統(tǒng)研究NF-κB相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：（1）p65在IOIP樣本中表達(dá)上調(diào)，陽性位于IOIP胞漿、胞核中，部分樣品中p65已轉(zhuǎn)入細(xì)胞核中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用。IκBζ在IOIP樣本中呈胞核強(qiáng)陽性表達(dá)，NFKBIZ基因表達(dá)上調(diào)。p-p65在IOIP中呈胞核強(qiáng)陽性表達(dá)。p50陽性位于胞漿、胞核。IκBα在IOIP樣本中呈胞漿陽性表達(dá)，部分胞核陽性。（2）NF-κB/p65、p50、IκBα及IκBζ陽性定位主要在小淋巴細(xì)胞，上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞中。（3）NF-κB二聚體形式主要為p65-p50，同時(shí)存在p65-p65，p50-p50。（4）本研究采用術(shù)中病理組織原代培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)IOIP原代細(xì)胞主要為纖維細(xì)胞。p65、IκBα、IκBζ在纖維細(xì)胞中呈胞漿、胞核強(qiáng)陽性表達(dá)，所以，IOIP的纖維化機(jī)制可能與NF-κB通路的激活有關(guān)。（5）本研究表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示，IOIP樣本中NF-κB相關(guān)部分基因表達(dá)上調(diào)，NF-κB信號(hào)通路可能被激活。液相懸浮芯片檢測結(jié)果顯示,IOIP組的MIF值與對(duì)照組的MIF值之間存在顯著性差異。 綜上所述，本研究表明IOIP樣本中NF-κB信號(hào)通路被激活，NF-κB與IOIP的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，為IOIP的診斷及治療提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：特發(fā)性眼眶炎性假瘤（IOIP） NF-κB 炎癥
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R777.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-24
• 1.1 特發(fā)性眼眶炎性假瘤概述12-16
• 1.1.1 臨床癥狀12
• 1.1.2 病理學(xué)特征12-13
• 1.1.3 臨床分型13
• 1.1.4 診斷與治療13
• 1.1.5 IOIP 發(fā)病機(jī)制的研究現(xiàn)狀13-16
• 1.2 NF-κB 概述16-21
• 1.2.1 NF-κB 信號(hào)通路概述16-19
• 1.2.2 NF-κB 信號(hào)通路的激活19-21
• 1.3 NF-κB 在 IOIP 發(fā)病機(jī)制中的研究21-22
• 1.4 本課題的研究內(nèi)容及意義22-24
• 第2章 樣本庫建立24-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-26
• 2.1.1 主要儀器24-25
• 2.1.2 主要試劑25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-31
• 2.2.1 血樣處理26
• 2.2.2 組織樣品處理26-31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論31-40
• 2.3.1 血樣信息32-33
• 2.3.2 組織信息33-40
• 2.4 本章小結(jié)40-42
• 第3章 NF-κB 相關(guān)蛋白在 IOIP 中的表達(dá)42-68
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料43-46
• 3.1.1 主要儀器43
• 3.1.2 主要試劑43-44
• 3.1.3 重要試劑的配方44-46
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法46-52
• 3.2.1 免疫組織化學(xué)46-48
• 3.2.2 免疫熒光化學(xué)48
• 3.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)48-49
• 3.2.4 免疫印跡法（Western blot）49-50
• 3.2.5 Real-time RT-PCR50-52
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論52-66
• 3.3.1 p50 在 IOIP 中的表達(dá)52-54
• 3.3.2 p65、p-p65 在 IOIP 中的表達(dá)54-59
• 3.3.3 IκBα在 IOIP 中的表達(dá)59-61
• 3.3.4 IκBζ在 IOIP 中的表達(dá)61-63
• 3.3.5 討論63-66
• 3.4 本章小結(jié)66-68
• 第4章 NF-κB 相關(guān)炎性因子在 IOIP 中的表達(dá)68-76
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料68-69
• 4.1.1 樣本材料68
• 4.1.2 芯片材料68-69
• 4.1.3 主要儀器69
• 4.1.4 主要試劑69
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法69-70
• 4.2.1 基因表達(dá)譜芯片研究69-70
• 4.2.2 液相芯片檢測70
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果70-75
• 4.3.1 基因表達(dá)譜芯片檢測結(jié)果70-71
• 4.3.2 懸浮芯片檢測結(jié)果71-72
• 4.3.3 IL-1β的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)結(jié)果72-73
• 4.3.4 討論73-75
• 4.4 本章小結(jié)75-76
• 結(jié)論76-78
• 參考文獻(xiàn)78-84
• 附錄84-86
• 1. 附表84-86
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文86-88
• 致謝88

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