本文關(guān)鍵詞：hBD-2體外抗菌免疫防御功能的研究

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【摘要】：目的：構(gòu)建人鼻黏膜上皮細胞原代體外培養(yǎng)模型,評估hBD-2基因轉(zhuǎn)染人鼻黏膜原代上皮細胞培養(yǎng)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的體外抗菌活性,為進一步hBD-2在體內(nèi)的免疫防御功能研究提供依據(jù)。 方法：1.收集人下鼻甲黏膜,酶消化結(jié)合組織塊法體外培養(yǎng)人鼻黏膜上皮細胞,免疫組化鑒定結(jié)果；2.脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)重組pIRES2-Zsgreen1-hBD2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人鼻黏膜上皮細胞,熒光顯微鏡、熒光定量RT-PCR法檢測人鼻黏膜上皮細胞hBD-2表達；3.收集細胞培養(yǎng)上清,用打孔法評價對鼻-鼻竇炎常見菌群的抗菌活性。 結(jié)果：1.經(jīng)細胞角蛋白AE1/AE2免疫組化鑒定體外培養(yǎng)的人鼻黏膜原代細胞為上皮細胞,細胞陽性率達93.1%;2.熒光顯微鏡檢測hBD-2轉(zhuǎn)染后的細胞表現(xiàn)出綠色熒光,轉(zhuǎn)染率約35%。熒光定量RT-PCR法檢測人鼻黏膜上皮細胞hBD-2mRNA表達升高；3.轉(zhuǎn)染hBD-2的細胞培養(yǎng)上清對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和肺炎鏈球菌均產(chǎn)生抑菌環(huán)。 結(jié)論：1.酶消化結(jié)合組織塊法體外培養(yǎng)鼻黏膜上皮細胞,細胞分離率高,增殖速度快；2.脂質(zhì)體介導(dǎo)重組pIRES2-Zsgreen1-hBD2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人鼻黏膜上皮細胞后能有效表達hBD-2；3.轉(zhuǎn)染表達hBD-2基因的人鼻黏膜上皮細胞能產(chǎn)生有效的抗菌肽并在體外發(fā)揮抗菌免疫防御作用。圖9幅,表1個,參考文獻33篇。
【關(guān)鍵詞】：鼻黏膜上皮細胞 質(zhì)粒 轉(zhuǎn)染 hBD-2 抗菌
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R765.41
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-8
• 符號說明8-9
• 1 前言9-12
• 2 材料與方法12-24
• 2.1 主要材料與設(shè)備12-15
• 2.2 人鼻黏膜上皮細胞原代培養(yǎng)及鑒定15-17
• 2.3 pIRES2-Zsgreen1-hBD2及pIRES2-Zsgreen1質(zhì)粒的抽提、純化17-19
• 2.4 hBD-2重組質(zhì)粒在鼻黏膜上皮細胞中的轉(zhuǎn)染表達19-20
• 2.5 轉(zhuǎn)染細胞中表達產(chǎn)物的檢測20-22
• 2.6 體外抑菌實驗22-24
• 3 實驗結(jié)果24-30
• 3.1 鼻黏膜上皮細胞形態(tài)特征24-25
• 3.2 免疫組化鑒定鼻黏膜上皮細胞結(jié)果25
• 3.3 保存質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化25-26
• 3.4 脂質(zhì)體介導(dǎo)pIRES2-Zsgreen1-hBD2轉(zhuǎn)染鼻黏膜上皮細胞26-27
• 3.5 熒光定量RT-PCR檢測hBD-2mRNA的表達27-28
• 3.6 細胞轉(zhuǎn)染上清體外抑菌實驗28-30
• 4 討論30-34
• 4.1 鼻黏膜上皮細胞原代培養(yǎng)30-31
• 4.2 脂質(zhì)體介導(dǎo)hBD-2基因轉(zhuǎn)染鼻黏膜上皮細胞31-32
• 4.3 體外抑菌實驗32-34
• 5 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述38-49
• 參考文獻44-49
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果49-50
• 致謝50

【共引文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 程蘭玲;荷斯坦奶牛乳腺上皮細胞β-防御素mRNA的表達及可能信號通路的初步研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號：702419