本文關(guān)鍵詞：STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌細胞CNE2中的表達變化及意義

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【摘要】：目的：鼻咽癌是我國廣東、廣西及福建等南方地區(qū)的常見惡性腫瘤之一，目前其主要治療方法是放療加化療等綜合性治療，但其5年生存率只有50%左右，晚期病人的治療效果及生存時間更差。本研究旨在觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）體外對鼻咽癌CNE2細胞的生長影響，同時通過分析其過程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達變化，揭示EGCG抗鼻咽癌的機制，為開發(fā)與尋找新藥以提高鼻咽癌的治療效果提供實驗依據(jù)。 方法：1.實驗室體外條件下培養(yǎng)鼻咽癌低分化細胞株CNE2，用不同濃度的EGCG（0、40、80、160mg/L）干預(yù)24h、48h、72h后，分別于倒置顯微鏡下觀察CNE2細胞的形態(tài)學(xué)改變。2.使用不同濃度的EGCG作用CNE2細胞24h、48h、72h后，應(yīng)用MTT法間接檢測細胞增殖的變化，并計算其增殖抑制率。3.使用不同濃度的EGCG作用于CNE2細胞48h后，使用Hoechst33258染色觀察細胞凋亡情況，并計算其凋亡率。4.應(yīng)用Transwell細胞侵襲實驗檢測不同濃度EGCG作用后的CNE2細胞侵襲作用的變化。5.使用流式細胞儀檢測不同濃度的EGCG作用鼻咽癌細胞株CNE2不同時間后對細胞周期的影響。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測EGCG抗鼻咽癌細胞株CNE2過程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達變化。 結(jié)果：1.倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)CNE2細胞分裂相變少，，部分細胞變圓，隨著EGCG濃度的增加和作用時間的延長，培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)越來越多的細胞漂浮及壞死的現(xiàn)象。2.MTT法檢測結(jié)果顯示，隨著EGCG的濃度增加及作用時間延長，EGCG對鼻咽癌細胞株CNE2的增殖抑制作用不斷增加，且呈濃度與時間依賴性（p0.05）。3.Hochest33258染色結(jié)果顯示，EGCG處理CNE2細胞后出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變?nèi)绾怂榱�、核濃縮等。與對照組比較，隨著EGCG濃度的增加，凋亡細胞數(shù)不斷增多（p＜0.05）。4.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示：不同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分別作用于CNE2細胞24h、48h后，停滯在G1/G0期細胞百分率分別為：（46.67±0.38）%、（55.20±0.33）%、（62.33±0.28）%、（68.65±0.40）%和（49.12±0.28）%、（57.73±0.45）%、（64.36±0.26）%、（69.62±0.33）%。與對照組比較，各實驗組G1/G0期細胞百分率明顯增加(P0.05)，各實驗組兩兩比較差異顯著(P0.05)，呈濃度與時間依賴性。5.不同濃度EGCG作用CNE2細胞后，Transwell細胞侵襲實驗結(jié)果顯示：隨著EGCG濃度的升高，與對照組相比，CNE2細胞的侵襲作用呈濃度依賴性減弱（p0.05）。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測結(jié)果顯示：CNE2細胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相對表達量隨著EGCG濃度升高與作用時間延長有降低趨勢（P0.05）。 結(jié)論：1.EGCG呈濃度依賴性與時間依賴性下調(diào)STAT3mRNA的表達，這可能作為EGCG抗鼻咽癌的生物學(xué)作用機制之一。2.EGCG抑制CNE2細胞的侵襲作用，可能與其呈濃度依賴性與時間依賴性下調(diào)MMP-2mRNA的表達相關(guān)。3.EGCG抑制CNE2細胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，可能與其呈濃度與時間依賴性下調(diào)CyclinD1mRNA的表達相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：EGCG STAT3 MMP-2 CyclinD1 鼻咽癌 凋亡
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英漢縮略詞對照表9-10
• 前言10-13
• 1 材料與方法13-26
• 1.1 實驗材料與儀器13-15
• 1.2 實驗方法15-26
• 2 結(jié)果26-36
• 2.1 EGCG作用CNE2細胞的形態(tài)變化觀察26-27
• 2.2 EGCG對CNE2細胞增殖的抑制作用27-28
• 2.3 Hochest33258染色觀察EGCG誘導(dǎo)CNE2細胞的凋亡28-29
• 2.4 EGCG對細胞周期的影響29-31
• 2.5 EGCG對CNE2細胞侵襲作用的影響31-32
• 2.6 EGCG對CNE2細胞STAT3、MMP-2及CyclinD1mRNA的影響32-36
• 3 討論36-43
• 4 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-49
• 綜述49-63
• 參考文獻56-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63-64
• 致謝64

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本文編號：656282