本文關(guān)鍵詞：IFI16基因穩(wěn)定表達抑制Hep-2細胞軟瓊脂集落形成

  更多相關(guān)文章： IFI16 Hep-2 軟瓊脂集落形成 細胞凋亡 流式細胞儀 NF-kappa-B

【摘要】：喉鱗癌是頭頸部一種常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢,并趨向于年輕化,傳統(tǒng)的治療方法對中、晚期喉癌的治療療效并不理想,且毒副作用很大。近年來興起的腫瘤綜合治療正愈來愈受到人們的重視,基因治療就是其中的治療方法之一,因此,尋找喉癌發(fā)病的相關(guān)基因,對于揭示喉癌的發(fā)病分子機理以及喉癌早期診斷與預(yù)防都有很重要的作用。已有研究資料表明喉癌的發(fā)生除了與p53等腫瘤抑制基因有關(guān),還與干擾素可誘導(dǎo)的IFI-200家族成員IFI16基因有關(guān)。目前已知IFI16基因具有抗乳腺癌、前列腺癌的作用,并且在頭頸部鱗狀細胞癌HNO136細胞中表現(xiàn)出抑制細胞生長的作用。 除此之外,IFI16基因在癌細胞中表達很低。而核因子Nuclear factor-kappa-B在癌細胞中呈現(xiàn)高表達狀態(tài),廣泛參與細胞的免疫和炎癥反應(yīng)。已有研究證明NF-κB核因子能促進癌細胞的增殖、侵潤和轉(zhuǎn)移,加強促進癌細胞繼續(xù)發(fā)展的抗凋亡蛋白質(zhì)表達,還與細胞癌基因的表達息息相關(guān),并有抗細胞炎癥、抗細胞凋亡的作用。目前,針對于藥物抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性作用,來探究腫瘤的藥物治療方法,這也很可能是喉鱗癌Hep-2細胞潛在、有效的臨床治療方法。PDTC是NF-κB的有效抑制劑。近年來,有研究報道姜黃素Curcumin也有抑制NF-kappa-B轉(zhuǎn)錄因子的作用,所以,本實驗就利用PDTC和Curcumin在喉鱗癌Hep-2細胞中聯(lián)合作用抑制NF-κB核因子的活性,來檢測Hep-2細胞的增殖能力。結(jié)果顯示,Curcumin協(xié)同PDTC作用于Hep-2細胞,明顯降低了Hep-2細胞的增殖能力,并能誘導(dǎo)Hep-2細胞發(fā)生凋亡。這一結(jié)果為本實驗室后續(xù)的研究工作打下了一定的理論和實踐基礎(chǔ),對喉鱗癌的臨床治療有著非常重要的促進作用。 本研究將RT-PCR擴增得到的IFI16基因克隆到pEGFP-C1載體上構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-IFI16,重組質(zhì)粒pEGFP-IFI16經(jīng)磷酸鈣轉(zhuǎn)染導(dǎo)入Hep-2細胞后,經(jīng)G418篩選得到IFI16基因穩(wěn)定表達的Hep-2/pEGFP-IFI16細胞系,利用熒光顯微鏡和半定量RT-PCR觀察分析IFl16基因在Hep-2細胞中穩(wěn)定表達情況,以及分析IFI16基因穩(wěn)定表達對Hep-2細胞軟瓊脂集落形成的影響,并進一步用流式細胞儀分析IFI16基因穩(wěn)定表達對Hep-2細胞凋亡的影響。pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep-2細胞后,在熒光顯微鏡下觀察顯示有明顯的綠色熒光信號,轉(zhuǎn)染Hep-2細胞后半定量RT-PCR分析IFI16基因mRNA水平結(jié)果顯示條帶亮度明顯升高,軟瓊脂細胞集落形成試驗結(jié)果顯示Hep-2/pEGFP-IFI16細胞系集落形成數(shù)目明顯少于對照細胞系Hep-2/pEGFP-C1的集落數(shù)(P0.01),凋亡分析結(jié)果顯示Hep-2/pEGFP-IFI16細胞系的凋亡細胞百分率明顯高于對照細胞系Hep-2/pEGFP-C1的凋亡率。上述研究結(jié)果說明,成功構(gòu)建了能在Hep-2細胞中穩(wěn)定表達IFI16基因的pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒,IFI16基因穩(wěn)定表達能抑制Hep-2細胞軟瓊脂集落形成并能誘導(dǎo)Hep-2細胞發(fā)生凋亡。另外,Hep-2/pGreenPuro-IFI16細胞系也正在構(gòu)建中。 本實驗通過構(gòu)建pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒建立IFI16基因穩(wěn)定表達的Hep-2/pEGFP-IFI16細胞系,來探討IFI16基因穩(wěn)定表達對喉癌細胞系Hep-2細胞生物學(xué)特征軟瓊脂集落形成及凋亡的影響。并且想通過基因沉默技術(shù)使IFI16基因表達沉默,反向驗證IFI16基因穩(wěn)定表達在Hep-2細胞脂集落形成中的作用。從以上結(jié)果可以看出IFI16基因穩(wěn)定表達能抑制Hep-2細胞軟瓊脂集落形成可能是通過促進Hep-2細胞發(fā)生凋亡而介導(dǎo)的,這也為進一步闡明IFI16基因穩(wěn)定表達能抑制Hep-2細胞軟瓊脂集落形成的分子機制奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：IFI16 Hep-2 軟瓊脂集落形成 細胞凋亡 流式細胞儀 NF-kappa-B
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-11
• 第一章 腫瘤的綜合治療現(xiàn)狀及其發(fā)展趨勢(文獻綜述)11-20
• 1.脾瘤治療的歷史背景11-13
• 1.1 腫瘤的傳統(tǒng)治療方法11-13
• 1.1.1 手術(shù)治療12
• 1.1.2 放射治療12
• 1.1.3 化學(xué)治療12-13
• 1.2 腫瘤多學(xué)科綜合治療概念的形成13
• 2. 腫瘤綜合治療的現(xiàn)狀13-14
• 3. 腫瘤的綜合治療手段14-19
• 3.1 手術(shù)與放療、化療聯(lián)合作用14
• 3.2 生物治療與放射治療、化學(xué)治療、中醫(yī)藥治療聯(lián)合作用14-15
• 3.2.1 免疫治療與放射治療聯(lián)合作用15
• 3.2.2 免疫治療與化學(xué)治療聯(lián)合作用15
• 3.2.3 免疫治療與中醫(yī)藥治療聯(lián)合作用15
• 3.3 中醫(yī)藥治療與手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療聯(lián)合作用15-17
• 3.3.1 中醫(yī)藥治療與手術(shù)聯(lián)合作用15-16
• 3.3.2 中醫(yī)藥治療與放療聯(lián)合作用16
• 3.3.3 中醫(yī)藥治療與化學(xué)治療聯(lián)合作用16-17
• 3.4 熱療與放射治療、化學(xué)治療、免疫治療聯(lián)合作用17-18
• 3.4.1 熱療與放療聯(lián)合作用17
• 3.4.2 熱療與化療聯(lián)合作用17
• 3.4.3 熱療與免疫治療聯(lián)合作用17-18
• 3.5 營養(yǎng)治療和心理治療在綜合治療中的作用18-19
• 3.5.1 營養(yǎng)治療18
• 3.5.2 心理治療18-19
• 4. 討論19
• 5. 展望19-20
• 第二章 IFI16基因穩(wěn)定表達抑制Hep-2細胞軟瓊脂集落形成20-33
• 1. 材料與方法20-27
• 1.1 材料20
• 1.1.1 主要儀器20
• 1.1.2 主要試劑20
• 1.2 方法20-27
• 1.2.1 Hep-2細胞總RNA的提取及其濃度測定20-21
• 1.2.2 Hep-2細胞總RNA的cDNA第一條鏈的合成21-22
• 1.2.3 IFI16基因編碼區(qū)CDS的獲得22
• 1.2.4 pUCm-IFI16重組質(zhì)粒的BamH I酶切22
• 1.2.5 pEGFP-C1表達載體的BamH I酶切22-23
• 1.2.6 pEGFP-C1載體與IFI16基因片段的連接23
• 1.2.7 pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化23-24
• 1.2.8 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的擴大培養(yǎng)24
• 1.2.9 質(zhì)粒DNA的提取24
• 1.2.10 pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒DNA的大提24-25
• 1.2.11 細胞轉(zhuǎn)染25
• 1.2.12 細胞轉(zhuǎn)染效率的檢測25-26
• 1.2.13 篩選建立細胞系26-27
• 1.2.14 細胞集落形成試驗27
• 1.2.15 凋亡檢測27
• 2. 結(jié)果27-32
• 2.1 pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒的構(gòu)建27-29
• 2.2 pEGFP-IFI16重組質(zhì)粒在Hep-2細胞中的表達29-30
• 2.3 Hep-2/pEGFP-IFI16細胞系的建立30
• 2.4 IFI16基因穩(wěn)定表達抑制Hep-2細胞集落形成30-31
• 2.5 IFI16基因穩(wěn)定表達誘導(dǎo)Hep-2細胞發(fā)生凋亡31-32
• 3. 討論32-33
• 第三章 姜黃素協(xié)同NF-κB抑制劑PDTC作用于Hep-2細胞33-39
• 1. 材料與方法34-35
• 1.1 材料34-35
• 1.1.1 主要儀器34
• 1.1.2 主要試劑34-35
• 1.2 方法35
• 1.2.1 細胞集落形成試驗35
• 1.2.2 凋亡檢測35
• 2. 結(jié)果35-37
• 2.1 Curcumin與PDTC協(xié)同作用抑制Hep-2細胞集落形成35-36
• 2.2 Curcumin與PDTC協(xié)同作用誘導(dǎo)Hep-2細胞發(fā)生凋亡36-37
• 3. 討論37-39
• 參考文獻39-44
• 致謝44-46
• 作者簡歷46-48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊祖安;;腸內(nèi)營養(yǎng)治療在腫瘤綜合治療中的運用[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年20期

2 高麗娜;;膀胱腫瘤綜合治療和護理[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2009年25期

3 趙菁;陳建明;邱明;應(yīng)奇才;;干擾素誘導(dǎo)的IFI-200蛋白家族研究進展[J];杭州師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年05期

4 李海;羅倩;陳鋼;李海寧;劉海濤;李麗;梁銳;;熱療在惡性腫瘤綜合治療中的作用初探[J];中國水電醫(yī)學(xué);2009年02期

5 陳建明;趙菁;葛莉偉;;干擾素-γ對喉癌Hep-2細胞增殖和凋亡的影響[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2011年03期

6 陳建明;趙菁;邱明;;IFI16基因外來表達對喉癌細胞Hep-2的影響[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2012年02期

7 于曉原;高巧梅;牛進寶;李高中;韓穎;;中醫(yī)藥在惡性腫瘤綜合治療中的倫理價值[J];中國醫(yī)學(xué)倫理學(xué);2010年06期

8 陳淑芹;金敬順;陳霞;;腫瘤的綜合治療方法[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年02期

9 蘭東強;劉騫;;多學(xué)科協(xié)作綜合治療腫瘤的思考[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年02期

10 廖貴清;蘇宇雄;;口腔頜面部惡性腫瘤的多學(xué)科綜合序列治療[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2011年01期

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本文編號：653398