本文關(guān)鍵詞：鼻咽癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移相關(guān)血清miRNAs的篩選及鑒定

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【摘要】：背景和目的： 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是在我國(guó)華南地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤，由于其對(duì)高能射線較敏感，加之鼻咽部解剖位置較隱蔽，放射治療是分期較早患者的主要治療手段，中晚期患者在此基礎(chǔ)上還需行同步化療[1]，患者的5年總生存率約為70%[2]，而5年的復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率可達(dá)到30%-40%[3]。復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響鼻咽癌患者生活質(zhì)量及生存期長(zhǎng)短的主要因素，而目前針對(duì)鼻咽癌復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)大多存在局限性，相關(guān)檢測(cè)的特異性通常較低、靈敏度也較差[4]，因此迫切需要發(fā)掘特異性強(qiáng)、靈敏度高同時(shí)又易行動(dòng)態(tài)觀察的血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)以加大對(duì)鼻咽癌患者復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)與早期干預(yù)。 MircoRNAs(miRNAs)是一類具有調(diào)控功能的單鏈非編碼小分子RNA，長(zhǎng)約18~25nt，主要通過與其靶mRNA分子的3'端非編碼區(qū)(3'-UTR)結(jié)合發(fā)揮作用，在蛋白質(zhì)翻譯水平上特異性抑制目的基因表達(dá)，參與調(diào)控生物生長(zhǎng)和發(fā)育等許多復(fù)雜的生命過程[5][6][7]。雖然目前miRNAs的生物學(xué)功能還尚未完全清楚，但可以肯定的是它們擁有相對(duì)特異的表達(dá)模式，同時(shí)參與調(diào)節(jié)生物的各種病理生理過程。異常的miRNAs表達(dá)與人類某些疾病相關(guān)，特別地，大量報(bào)道顯示，miRNAs是參與結(jié)直腸癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、卵巢癌等常見腫瘤發(fā)生及進(jìn)展的關(guān)鍵分子[8][9]，因此，miRNAs被認(rèn)為是一組新的具有癌或抑癌功能的基因，其具有特異性的表達(dá)譜[10]。值得強(qiáng)調(diào)的，循環(huán)中的游離miRNAs更具有相對(duì)穩(wěn)定存在的特性且易于被檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，可用于動(dòng)態(tài)觀察腫瘤狀態(tài)及對(duì)患者臨床療效及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，這使得循環(huán)中miRNA作為新的腫瘤標(biāo)志物具有較好的臨床應(yīng)用前景[1][2][3]。 Ki-67作為細(xì)胞增殖狀態(tài)的印記，其表達(dá)水平通常與癌癥的臨床病程相關(guān)[4]。血清Cyfra21-1作為細(xì)胞角蛋白1（9CK-19）的可溶性片段，在鱗癌中含量豐富[5]。血清SCCA也可作為多種鱗狀細(xì)胞癌的血清學(xué)標(biāo)記[6]。血清LDH與ALP作為臨床生化常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)，近年來(lái)也有與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的研究被開展[7][8],但血清miRNAs與上述腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)被用于監(jiān)測(cè)鼻咽癌復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的研究尚未見報(bào)道。 本研究擬應(yīng)用miRCURY LNA microRNA Arrays芯片篩選不同預(yù)后的鼻咽癌患者放射治療前后血清中差異表達(dá)的miRNAs，并用qRT-PCR（Taqman探針法）進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)檢測(cè)鼻咽癌患者組織Ki-67表達(dá)情況，治療后血清Cyfra21-1、SCCA、LDH、ALP含量，探討血清miRNAs與上述腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)與鼻咽癌患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，并尋找評(píng)估鼻咽癌預(yù)后生存時(shí)間的可能腫瘤標(biāo)志物。 方法： 1.分別收集3例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及3例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者治療前后血清配對(duì)血清，應(yīng)用miRCURY LNA microRNA Arrays芯片對(duì)血清miRNAs差異性表達(dá)譜篩查。 2.分別收集29例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及19例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者治療前后血清配對(duì)血清，，應(yīng)用qRT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鼻咽癌差異性表達(dá)譜中差異性表達(dá)較明顯的miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證。 3.分別收集上述29例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及19例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者鼻咽癌組織石蠟塊及治療后血清，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)患者鼻咽癌組織Ki-67表達(dá)情況，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)治療后血清Cyfra21-1、SCCA含量，連續(xù)監(jiān)測(cè)法檢測(cè)治療后血清LDH、ALP含量。 4.應(yīng)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析上述指標(biāo)與患者臨床預(yù)后及其生存期間的關(guān)系。 結(jié)果： 1.miRNAs芯片結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組較未復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組放療前血清中miRPlusE1253表達(dá)上調(diào)，miR-22, miR-29a,miR-720, miR-665,miR-26b，miR-125b表達(dá)下調(diào)。復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組較未復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組放療后血清中miRPlusE1072表達(dá)上調(diào),miR-22,miR-29b,miR-143,miR491-3p,let-7c, miR-720,miR-550,miR-30c, miR-26b表達(dá)下調(diào)，其差異表達(dá)均在2倍以上。 2.qRT-PCR驗(yàn)證顯示治療前miR-26b,miR-29a,miR-125b及治療后miR-29b,miR-143,的表達(dá)水平在復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組及未復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組間未見明顯差異。 3.聯(lián)合檢測(cè)治療前miR-29b、miR-125b及組織Ki-67可建立預(yù)判鼻咽癌患者復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移最佳方程，該方程特異性及靈敏度分別為75.9%和78.9%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值分別為84.6%和68.1%。 4.COX回歸分析示治療前血清miR-29a及miR-125b為無(wú)進(jìn)展生存期及總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。 結(jié)論： 1.鼻咽癌患者治療前血清miR-29a及miR-125b為無(wú)進(jìn)展生存期及總生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。聯(lián)合檢測(cè)血清miR-29a及miR-125b可用于評(píng)估鼻咽癌患者不良預(yù)后生存期。 2.鼻咽癌患者治療前血清miR-29b、miR-125b及組織Ki-67聯(lián)合檢測(cè)可用于預(yù)判鼻咽癌患者治療后的復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 miRNA-29b miR-125b Ki-67 Cyfra21-1 腫瘤標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• Abstract6-10
• 摘要10-13
• 引言13-15
• 1 材料和方法15-24
• 1.1 臨床資料15-16
• 1.2 主要材料16-18
• 1.3 主要方法18-24
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24
• 2 結(jié)果24-35
• 2.1 鼻咽癌血清 miRNA 微陣列芯片差異性 miRNA 表達(dá)譜24-26
• 2.2 鼻咽癌患者基線特征表26-27
• 2.3 鼻咽癌差異性表達(dá) miRNA 實(shí)時(shí)定量熒光 PCR 驗(yàn)證情況27
• 2.4 復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組及未復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組間患者鼻咽癌組織 Ki-67 檢測(cè)27-28
• 2.5 鼻咽癌患者復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組及未復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)表達(dá)檢測(cè)28-29
• 2.6 基線指標(biāo)、血清 miRNAs、組織 Ki-67 和血清指標(biāo)對(duì)復(fù)發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移診斷的Logistic 回歸分析及 ROC 分析29-33
• 2.7 多變量 COX 回歸分析及鼻咽癌預(yù)后模型的建立33-34
• 2.8 Kaplan-Meier 生存分析34-35
• 3 討論35-40
• 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 文獻(xiàn)綜述47-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附表 157-58
• 附表 258-59
• 附表 359-60
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

本文編號(hào)：648681