本文關(guān)鍵詞：鼻咽癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移相關(guān)血清miRNAs的篩選及鑒定

  更多相關(guān)文章： 鼻咽癌 miRNA-29b miR-125b Ki-67 Cyfra21-1 腫瘤標志物

【摘要】：背景和目的： 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是在我國華南地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤，由于其對高能射線較敏感，加之鼻咽部解剖位置較隱蔽，放射治療是分期較早患者的主要治療手段，中晚期患者在此基礎(chǔ)上還需行同步化療[1]，患者的5年總生存率約為70%[2]，而5年的復發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移率可達到30%-40%[3]。復發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移是影響鼻咽癌患者生活質(zhì)量及生存期長短的主要因素，而目前針對鼻咽癌復發(fā)與轉(zhuǎn)移的腫瘤標志物檢測大多存在局限性，相關(guān)檢測的特異性通常較低、靈敏度也較差[4]，因此迫切需要發(fā)掘特異性強、靈敏度高同時又易行動態(tài)觀察的血清學檢測指標以加大對鼻咽癌患者復發(fā)與轉(zhuǎn)移的監(jiān)測與早期干預。 MircoRNAs(miRNAs)是一類具有調(diào)控功能的單鏈非編碼小分子RNA，長約18~25nt，主要通過與其靶mRNA分子的3'端非編碼區(qū)(3'-UTR)結(jié)合發(fā)揮作用，在蛋白質(zhì)翻譯水平上特異性抑制目的基因表達，參與調(diào)控生物生長和發(fā)育等許多復雜的生命過程[5][6][7]。雖然目前miRNAs的生物學功能還尚未完全清楚，但可以肯定的是它們擁有相對特異的表達模式，同時參與調(diào)節(jié)生物的各種病理生理過程。異常的miRNAs表達與人類某些疾病相關(guān)，特別地，大量報道顯示，miRNAs是參與結(jié)直腸癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、卵巢癌等常見腫瘤發(fā)生及進展的關(guān)鍵分子[8][9]，因此，miRNAs被認為是一組新的具有癌或抑癌功能的基因，其具有特異性的表達譜[10]。值得強調(diào)的，循環(huán)中的游離miRNAs更具有相對穩(wěn)定存在的特性且易于被檢測等優(yōu)勢，可用于動態(tài)觀察腫瘤狀態(tài)及對患者臨床療效及預后進行評估，這使得循環(huán)中miRNA作為新的腫瘤標志物具有較好的臨床應用前景[1][2][3]。 Ki-67作為細胞增殖狀態(tài)的印記，其表達水平通常與癌癥的臨床病程相關(guān)[4]。血清Cyfra21-1作為細胞角蛋白1（9CK-19）的可溶性片段，在鱗癌中含量豐富[5]。血清SCCA也可作為多種鱗狀細胞癌的血清學標記[6]。血清LDH與ALP作為臨床生化常規(guī)檢測指標，近年來也有與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的研究被開展[7][8],但血清miRNAs與上述腫瘤標志物聯(lián)合檢測被用于監(jiān)測鼻咽癌復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移的研究尚未見報道。 本研究擬應用miRCURY LNA microRNA Arrays芯片篩選不同預后的鼻咽癌患者放射治療前后血清中差異表達的miRNAs，并用qRT-PCR（Taqman探針法）進行驗證，同時檢測鼻咽癌患者組織Ki-67表達情況，治療后血清Cyfra21-1、SCCA、LDH、ALP含量，探討血清miRNAs與上述腫瘤標志物聯(lián)合檢測與鼻咽癌患者出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，并尋找評估鼻咽癌預后生存時間的可能腫瘤標志物。 方法： 1.分別收集3例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及3例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者治療前后血清配對血清，應用miRCURY LNA microRNA Arrays芯片對血清miRNAs差異性表達譜篩查。 2.分別收集29例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及19例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者治療前后血清配對血清，，應用qRT-PCR（Taqman探針法）對鼻咽癌差異性表達譜中差異性表達較明顯的miRNAs進行驗證。 3.分別收集上述29例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者及19例首次治療結(jié)束后5年內(nèi)未出現(xiàn)復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者鼻咽癌組織石蠟塊及治療后血清，應用免疫組化法檢測患者鼻咽癌組織Ki-67表達情況，化學發(fā)光法檢測治療后血清Cyfra21-1、SCCA含量，連續(xù)監(jiān)測法檢測治療后血清LDH、ALP含量。 4.應用相關(guān)統(tǒng)計學軟件分析上述指標與患者臨床預后及其生存期間的關(guān)系。 結(jié)果： 1.miRNAs芯片結(jié)果顯示，復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組較未復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組放療前血清中miRPlusE1253表達上調(diào)，miR-22, miR-29a,miR-720, miR-665,miR-26b，miR-125b表達下調(diào)。復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組較未復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組放療后血清中miRPlusE1072表達上調(diào),miR-22,miR-29b,miR-143,miR491-3p,let-7c, miR-720,miR-550,miR-30c, miR-26b表達下調(diào)，其差異表達均在2倍以上。 2.qRT-PCR驗證顯示治療前miR-26b,miR-29a,miR-125b及治療后miR-29b,miR-143,的表達水平在復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組及未復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組間未見明顯差異。 3.聯(lián)合檢測治療前miR-29b、miR-125b及組織Ki-67可建立預判鼻咽癌患者復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移最佳方程，該方程特異性及靈敏度分別為75.9%和78.9%，陽性預測值及陰性預測值分別為84.6%和68.1%。 4.COX回歸分析示治療前血清miR-29a及miR-125b為無進展生存期及總生存期的獨立預后因素。 結(jié)論： 1.鼻咽癌患者治療前血清miR-29a及miR-125b為無進展生存期及總生存期的獨立預后因素。聯(lián)合檢測血清miR-29a及miR-125b可用于評估鼻咽癌患者不良預后生存期。 2.鼻咽癌患者治療前血清miR-29b、miR-125b及組織Ki-67聯(lián)合檢測可用于預判鼻咽癌患者治療后的復發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 miRNA-29b miR-125b Ki-67 Cyfra21-1 腫瘤標志物
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• Abstract6-10
• 摘要10-13
• 引言13-15
• 1 材料和方法15-24
• 1.1 臨床資料15-16
• 1.2 主要材料16-18
• 1.3 主要方法18-24
• 1.4 統(tǒng)計學處理24
• 2 結(jié)果24-35
• 2.1 鼻咽癌血清 miRNA 微陣列芯片差異性 miRNA 表達譜24-26
• 2.2 鼻咽癌患者基線特征表26-27
• 2.3 鼻咽癌差異性表達 miRNA 實時定量熒光 PCR 驗證情況27
• 2.4 復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組及未復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組間患者鼻咽癌組織 Ki-67 檢測27-28
• 2.5 鼻咽癌患者復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組及未復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移組血清學相關(guān)指標表達檢測28-29
• 2.6 基線指標、血清 miRNAs、組織 Ki-67 和血清指標對復發(fā)遠處轉(zhuǎn)移診斷的Logistic 回歸分析及 ROC 分析29-33
• 2.7 多變量 COX 回歸分析及鼻咽癌預后模型的建立33-34
• 2.8 Kaplan-Meier 生存分析34-35
• 3 討論35-40
• 全文結(jié)論40-41
• 參考文獻41-47
• 文獻綜述47-57
• 參考文獻53-57
• 附表 157-58
• 附表 258-59
• 附表 359-60
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

本文編號：648681