本文關(guān)鍵詞：GJB2基因條件敲除小鼠耳蝸凋亡相關(guān)基因表達(dá)差異研究

  更多相關(guān)文章： 縫隙連接蛋白26 基因 死亡受體5 凋亡 遺傳性耳聾

【摘要】：耳聾是導(dǎo)致人類言語交流障礙的主要疾病，在中國人中，GJB2基因突變導(dǎo)致的先天性耳聾大約為12.2%，在NSHL未成年患者中GJB2基因突變的陽性檢出率高達(dá)20.1%，該基因突變是導(dǎo)致人類非綜合征性聾（nonsyndromic hearing loss，NSHL）的主要原因，研究其致病機制意義重大。研究表明GJB2基因條件敲除小鼠（cCx26Pax2Cre小鼠）出生后出現(xiàn)耳蝸細(xì)胞缺失，凋亡可能是GJB2基因敲除后耳蝸細(xì)胞缺失的主要原因，但是目前有關(guān)具體凋亡機制尚未見報道。本研究通過對cCx26Pax2Cre小鼠凋亡相關(guān)84個基因表達(dá)變化情況進(jìn)行觀察分析，探討GJB2基因突變導(dǎo)致耳聾的機制。 一、 cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸凋亡相關(guān)84個基因差異表達(dá)研究 我們選取cCx26Pax2Cre小鼠為實驗組，野生型BALB/C小鼠作為正常對照組，取P10和P18時小鼠，提取耳蝸膜迷路總RNA，，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用QRT-PCR Array檢測凋亡相關(guān)的84個功能基因的表達(dá)差異。選取小鼠耳蝸組織中表達(dá)最為穩(wěn)定的甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參照。結(jié)果顯示：與野生型小鼠相比，在P10時，一共有16個基因表達(dá)有生物學(xué)意義（19.05%），14個基因表達(dá)下調(diào)(87.5%)，其中9個下調(diào)基因為抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖的基因，5個基因為促進(jìn)細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)的基因；2個基因表達(dá)上調(diào)（12.5%），均為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因。在P18時，與野生型小鼠相比，一共有4個基因(4.76%)表達(dá)變化有生物學(xué)意義，其中3個基因表達(dá)下調(diào)（75%），全部為抑制細(xì)胞凋亡的基因（100%）；1個基因（Tnfrsf10b）表達(dá)上調(diào)（25%），為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因。與P10相比，P18時耳蝸組織中caspase-8表達(dá)上調(diào)。Bcl2l10和Tnfrsf10b在P10、P18兩個發(fā)育階段的變化均具有生物學(xué)意義，而且促進(jìn)細(xì)胞凋亡的Tnfrsf10b基因兩個時間段均表達(dá)上調(diào)。 二、死亡受體5（Death receptor, DR5）在cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸的表達(dá)的研究 選取P8、P12、P21小鼠用熒光標(biāo)記的免疫組織化學(xué)技術(shù)對表達(dá)上調(diào)的差異表達(dá)基因DR5（由Tnfrsf10b基因編碼）在耳蝸表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果顯示DR5在cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸支持細(xì)胞、毛細(xì)胞、螺旋韌帶II型纖維細(xì)胞、螺旋凸、螺旋緣、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿和胞膜、螺旋緣下方蝸軸螺旋管內(nèi)神經(jīng)纖維、蓋膜均有較強的陽性表達(dá)，隨小鼠日齡增加，表達(dá)逐漸增強，而在野生型小鼠耳蝸，DR5表達(dá)表現(xiàn)出不同的方式，先后在蓋膜、耳蝸支持細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、螺旋凸處可見表達(dá)，但表達(dá)強度均弱于相應(yīng)日齡的基因敲除小鼠。與野生型小鼠相比，cCx26Pax2Cre小鼠耳蝸神經(jīng)纖維DR5表達(dá)的光密度值明顯增大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異具有顯著性意義（P0.05）。 我們推測在cCx26Pax2Cre小鼠縫隙連接功能異常，可能導(dǎo)致耳蝸細(xì)胞出現(xiàn)葡萄糖短缺，導(dǎo)致ATP不足，產(chǎn)生大量的過氧化物，引起DR5的表達(dá)上調(diào)，激活了DR5介導(dǎo)的死亡受體途徑，或通過caspase-8間接激活線粒體通路使凋亡信號進(jìn)一步放大，導(dǎo)致了耳蝸柯替氏器細(xì)胞凋亡的發(fā)生，隨之引起螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞營養(yǎng)障礙，通過啟動相同的途徑導(dǎo)致螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和神經(jīng)纖維的繼發(fā)性缺失，最終引起cCx26Pax2Cre小鼠出現(xiàn)聽力下降。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白26 基因 死亡受體5 凋亡 遺傳性耳聾
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R764.43
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-31
• 附表31-49
• 討論49-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述 細(xì)胞凋亡與耳聾研究進(jìn)展61-79
• 參考文獻(xiàn)72-79
• 致謝79-80
• 個人簡歷80-81

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王云峰;Connexin26蛋白表達(dá)下降致耳蝸病理學(xué)變化和治療探索[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

本文編號：626190