本文關(guān)鍵詞：Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪聲暴露的初步研究

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【摘要】：目的：為探索GJB2基因突變導(dǎo)致耳聾的機(jī)制及防治，我們擬建立Cx26基因敲除小鼠模型。同時(shí)初步探索慢性噪聲暴露對(duì)某一發(fā)育階段敲除Cx26的小鼠內(nèi)耳的影響。 方法：1.（1）條件誘導(dǎo)性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：應(yīng)用PCR技術(shù)鑒定兩種基因改建的小鼠Cx26~(loxP/loxP)（C57/BL背景）和ROSA26~(Cre-ERT)，通過遺傳學(xué)手段雜交建立Cx26條件誘導(dǎo)性基因敲除小鼠模型。這種小鼠是在Rosa26的基因位點(diǎn)插入了配體依賴Cre重組酶基因，人工合成的雌激素拮抗劑tamoxifen（TMX）能夠激活Cre表達(dá)。從而切除GJB2基因位點(diǎn)上被loxp序列錨定的片段(2)條件性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：使用PCR技術(shù)鑒定出Cx26LoxP/LoxP小鼠（CD1背景）與Pax2·Cre小鼠，Cre隨Pax2的表達(dá)于特定組織中表達(dá)，根據(jù)遺傳學(xué)定律兩者雜交，F(xiàn)2代獲得條件性Cx26基因敲除小鼠（Cx26-/-；Pax2·Cre）。2.慢性噪聲暴露： Cx26~(loxP/loxP);ROSA26~(Cre-ERT)小鼠在出生第15天腹腔注射TMX3mg/10g體重，小鼠出生第21天，每日暴露于100dBSPL穩(wěn)態(tài)白噪聲，，每天8小時(shí)，連續(xù)暴露5天。聽性腦干反應(yīng)檢測(cè)小鼠聽閾，耳蝸基底膜鋪片觀察毛細(xì)胞情況。 結(jié)果：基因分型結(jié)果顯示我們通過遺傳學(xué)手段將兩種基因改建小鼠雜交，獲得了Cx26條件誘導(dǎo)性基因敲除小鼠Cx26~(loxP/loxP);ROSA26~(Cre-ERT)和條件性Cx26~(loxP/loxP)；Pax2·Cre基因敲除小鼠。TMX注射組慢性噪聲暴露后底回毛細(xì)胞損傷較單純?cè)肼暯M嚴(yán)重，差異有顯著性。 結(jié)論：我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)室中建立了兩種Cx26基因敲除小鼠模型。1）時(shí)間誘導(dǎo)性Cx26基因敲除小鼠模型，該模型可以在耳蝸發(fā)育、內(nèi)淋巴電位產(chǎn)生和聽力形成的各個(gè)時(shí)期敲除Cx26基因。2）條件性Cx26基因敲除小鼠模型，該模型中小鼠耳蝸部分Cx26已被敲除。降低Cx26的表達(dá)增加噪聲對(duì)內(nèi)耳的損傷。
【關(guān)鍵詞】：連接蛋白26 基因敲除小鼠 遺傳性耳聾 基因分型 聽力損傷
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 英文縮略詞簡(jiǎn)表5-6
• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一部分9-20
• 前言9-12
• 材料與方法12-15
• 結(jié)果15-18
• 討論18-20
• 第二部分20-28
• 前言20-21
• 材料與方法21-22
• 結(jié)果22-25
• 討論25-28
• 參考文獻(xiàn)28-33
• 綜述33-43
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 致謝43-44

【共引文獻(xiàn)】

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6 孫R

本文編號(hào)：576176