本文關(guān)鍵詞：尾靜脈注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)小鼠視網(wǎng)膜激光損傷的治療作用

  更多相關(guān)文章： 視網(wǎng)膜 激光損傷 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 GFAP MMP-2

【摘要】：目的多種視網(wǎng)膜退行性疾病都以視網(wǎng)膜細(xì)胞喪失為特征,目前臨床上仍缺乏有效治療措施。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在視網(wǎng)膜損傷修復(fù)及神經(jīng)保護(hù)方面的研究中不斷體現(xiàn)出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立視網(wǎng)膜激光損傷模型,觀察MSCs治療后,損傷視網(wǎng)膜的形態(tài)學(xué)變化及視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況,并初步探討其分子學(xué)機(jī)制,為未來(lái)臨床應(yīng)用MSCs治療視網(wǎng)膜退行性疾病探索新的方法和理論依據(jù)。 方法 1.培養(yǎng)GFP-MSCs:體外培養(yǎng)C57BL/6小鼠綠色熒光蛋白標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(green fluorescent protein labeled mesenchymal stem cells, GFP-MSCs)并進(jìn)行傳代,細(xì)胞爬片觀察GFP表達(dá)情況。 2.制作視網(wǎng)膜激光損傷模型：135只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(15只)、損傷對(duì)照組(60只)和MSCs治療組(60只)。采用激光光凝方式建立視網(wǎng)膜激光損傷模型。 3.尾靜脈移植MSCs:激光光凝后1天,MSCs治療組小鼠尾靜脈注射0.2mlGFP-MSCs細(xì)胞懸液(含MSCs1×106個(gè)),損傷對(duì)照組小鼠尾靜脈注射等體積磷酸鹽緩沖液。 4.組織病理學(xué)改變：分別于視網(wǎng)膜激光光凝后第3、7、14和21天,處死各組小鼠并摘除眼球,做石蠟切片。采用蘇木精-伊紅染色觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài),并用圖像處理分析軟件測(cè)量激光斑直徑和外核層光感受器細(xì)胞核完全缺損區(qū)域直徑。 5.TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡：分別于各時(shí)點(diǎn)處死各組小鼠并摘除眼球,做冰凍切片。原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling, TUNEL)法檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況。 6.觀察GFP-MSCs細(xì)胞遷移：熒光顯微鏡觀察MSCs治療組GFP-MSCs向視網(wǎng)膜內(nèi)的遷移情況。 7. GFAP和MMP-2的基因表達(dá)：分別于各時(shí)點(diǎn)處死各組小鼠并摘除眼球,提取眼球總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)的基因表達(dá)變化。 結(jié)果 1.成功培養(yǎng)GFP-MSCs,GFP表達(dá)率高。 2.成功建立視網(wǎng)膜激光損傷模型。 3.光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),正常對(duì)照組視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)完整；損傷對(duì)照組及MSCs治療組均可見(jiàn)視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)損傷,但MSCs治療組較損傷對(duì)照組損傷程度減輕。激光光凝后第3天,損傷對(duì)照組與MSCs治療組間激光斑直徑比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.964, P0.05); MSCs治療組外核層光感受器細(xì)胞核完全缺損區(qū)域平均直徑小于損傷對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.769,P0.05)。激光光凝后第7、14和21天,MSCs治療組激光斑直徑(t=5.180、5.417、2.381)和外核層缺損區(qū)域直徑(t=3.530、3.224、3.162)均小于損傷對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.激光光凝后第3、7、14和21天,正常對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜內(nèi)均未見(jiàn)凋亡細(xì)胞；損傷對(duì)照組及MSCs治療組小鼠損傷部位視網(wǎng)膜內(nèi)可見(jiàn)凋亡細(xì)胞。激光光凝后各時(shí)間點(diǎn), MSCs治療組平均細(xì)胞凋亡數(shù)均小于損傷對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.142、7.479、6.678、3.953,P0.05)。 5.熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),激光光凝后第3、7、14和21天時(shí)未見(jiàn)MSCs治療組GFP-MSCs大量向視網(wǎng)膜內(nèi)遷移；僅于激光光凝后第7和14天時(shí)在視網(wǎng)膜下及脈絡(luò)膜新生血管處有少量遷移。 6.FQRT-PCR結(jié)果顯示,激光光凝后第14和21天時(shí)GFAP的mRNA水平低于損傷對(duì)照組(t=2.481、2.562,P0.05),第7、14和21天時(shí)MMP-2的mRNA水平低于損傷對(duì)照組(t=2.466、4.687、4.001,P0.05)。 結(jié)論尾靜脈注射MSCs能有效抑制激光損傷后的視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡,減輕小鼠視網(wǎng)膜激光損傷后的炎癥反應(yīng),改善視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu),限制損傷向周?chē)M織蔓延。
【關(guān)鍵詞】：視網(wǎng)膜 激光損傷 間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 GFAP MMP-2
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-17
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料和方法17-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-36
• 2.1 GFP-MSCs的培養(yǎng)和細(xì)胞爬片26-27
• 2.2 MSCs治療后的視網(wǎng)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)變化27-32
• 2.3 GFP-MSCs對(duì)視網(wǎng)膜激光損傷后細(xì)胞凋亡的影響32-35
• 2.4 MSCs向視網(wǎng)膜內(nèi)遷移情況35
• 2.5 FQRT-PCR檢測(cè)GFAP和MMP-2的基因表達(dá)35-36
• 3. 討論36-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明52-53
• 綜述53-64
• 綜述參考文獻(xiàn)61-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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4 朱婧;黃一飛;;激光眼損傷治療的研究進(jìn)展[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

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本文編號(hào)：566316