本文關(guān)鍵詞：促血管生成素參與脈絡(luò)膜新生血管生成可能的機制

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【摘要】：研究背景脈絡(luò)膜新生血管(CNV)疾病主要包括年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）、病理性近視和眼底血管樣條紋等，是引起視力損失的重要病因之一，其發(fā)生機制十分復(fù)雜，受多種因素或因子調(diào)控。缺血缺氧和Bruch膜的損傷是引發(fā)多種CNV疾病的重要病理機制。視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)-Bruch膜-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體完整性破壞導(dǎo)致血管生成因子和抑制因子的失衡，Bruch膜的破裂、脈絡(luò)膜的缺血都可活化RPE細(xì)胞合成血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及各種生長因子，導(dǎo)致CNV的生成。 促血管生成素(Ang)在血管的發(fā)育成熟與穩(wěn)定、調(diào)控血管完整性方面具有重要意義。其中Ang-1和Ang-2與血管生成關(guān)系最為密切。Ang-1、Ang-2通過與Tie2受體結(jié)合后激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）/蘇氨酸激酶(Akt)信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用。有研究表明Ang表達(dá)量高低與缺氧程度密切相關(guān)，在CNV的形成過程中發(fā)揮重要作用，但是具體機制尚不明確。此外，已有學(xué)者證實Ang與缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)存在共同信號通路，提示其可能受HIF-1轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 3-（5′-hydroxymethyl-2′-furyl）-1-benzyl indazole (YC-1)是一種具有優(yōu)越抗血管生成的新物質(zhì)，可抑制HIF-1表達(dá)。 目的探討促血管生成素-1(Ang-1)和促血管生成素-2(Ang-2)在CNV生成和缺氧條件下RPE細(xì)胞中的表達(dá)及機制。 方法（1）532nm激光誘導(dǎo)52只（104眼）雄性黑色C57BL/6J小鼠CNV模型。取激光照射后7d、14d和28d做觀察點，行熒光素眼底血管造影后在各時間點隨機處死小鼠（n=2），用組織病理學(xué)觀察CNV的生長情況。免疫熒光染色法檢測Ang-1、Ang-2、HIF-1在CNV生成中的表達(dá)情況；（2）將人RPE細(xì)胞培養(yǎng)在厭氧箱中，以建立缺氧模型。按缺氧時間0h、1h、4h、12h和24h分為5組，觀察Ang-1、Ang-2與HIF-1表達(dá)的變化；另取4h作觀察點，按處理因素分為缺氧對照組和HIF-1抑制劑YC-1處理組，YC-1濃度分別為1μmol·L-1、10μmol·L-1和100μmol·L-1，觀察抑制HIF-1后對Ang-1和Ang-2表達(dá)的影響。應(yīng)用免疫熒光染色法和Western blot分別檢測Ang-1、Ang-2與HIF-1蛋白的表達(dá)。采用單因素方差分析檢驗方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果（1）光凝后7d、14d和28d的光凝斑的百分率分別為58.3%（42/72）、62.5%（30/48）和46%（11/24），組織病理學(xué)檢查顯示光凝斑內(nèi)有新生血管形成，隨著時間延長，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞呈不同程度增生，可完全包繞CNV。免疫熒光結(jié)果顯示正常情況下小鼠存在Ang-1、Ang-2與HIF-1蛋白的表達(dá)，激光光凝4d時，Ang-2與HIF-1存在共表達(dá)區(qū)域，兩者均表達(dá)于光凝區(qū)、新生血管區(qū)及周圍視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜損傷區(qū)；激光光凝7d時Ang-1與HIF-1存在共表達(dá)區(qū)域，兩者均表達(dá)于光凝區(qū)、新生血管區(qū)及周圍視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜損傷區(qū)。（2）在此基礎(chǔ)上，RPE細(xì)胞體外實驗結(jié)果顯示，常氧條件下RPE細(xì)胞內(nèi)可見Ang-2蛋白表達(dá)，未見Ang-1及HIF-1蛋白表達(dá)；缺氧條件下Ang-1和Ang-2分別與HIF-1共表達(dá)于RPE細(xì)胞胞質(zhì)中。HIF-1與Ang-1在缺氧早期呈上升趨勢，其中HIF-1于缺氧后4h表達(dá)最高(0.451±0.022,t=5.401,P0.05)，24h后有所下降；Ang-1于缺氧后24h表達(dá)最高（1.342±0.059,t=20.100,P0.01）；Ang-2表達(dá)幾乎不變（1.542±0.129、1.621±0.131、1.574±0.146、1.624±0.027,t=0.044、0.673、0.244、0.700,均為P0.05）。濃度為1μmol·L-1、10μmol·L-1和100μmol·L-1的YC-1均可有效抑制HIF-1蛋白的表達(dá)（t=21.583、27.154、27.431,均為P0.01）。HIF-1α蛋白表達(dá)下調(diào)后，Ang-1蛋白表達(dá)也隨之受到抑制（t=9.492、15.487、17.942,均為P0.05），而Ang-2蛋白表達(dá)無明顯變化（t=0.859、0.178、1.565,均為P0.05）。 結(jié)論激光可成功誘導(dǎo)小鼠CNV模型，CNV在光凝后14d達(dá)到高峰。在早期CNV生成中Ang-2與HIF-1存在共表達(dá)區(qū)域，，可能參與CNV生成， Ang-1與HIF-1存在共表達(dá)區(qū)域，在晚期CNV生成中可能起重要作用；在此基礎(chǔ)上，體外實驗結(jié)果提示缺氧條件下人RPE細(xì)胞表達(dá)Ang-1上調(diào)，與HIF-1存在時相關(guān)系，Ang-2無明顯變化；抑制HIF-1后， Ang-1表達(dá)隨之降低。以上說明在CNV生成過程中Ang-1的表達(dá)可能受HIF-1選擇性調(diào)控，Ang-1與Ang-2參與了HIF-1相關(guān)的CNV生成，且參與CNV生成相關(guān)的Ang-1、Ang-2表達(dá)可能部分來源于RPE細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：脈絡(luò)膜新生血管 促血管生成素-1 促血管生成素-2 缺氧誘導(dǎo)因子-1 色素上皮 眼
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R773.4
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-20
• 1 引言20-21
• 2 材料21-22
• 3 方法22-29
• 4 結(jié)果29-34
• 5 討論34-37
• 小結(jié)37-38
• 參考文獻(xiàn)38-45
• 附錄45-48
• 個人簡歷和研究成果48-49
• 致謝49-50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張鵬,王雨生,胡丹,吳玉麗,羅亞娟,韓泉洪,惠延年;年齡相關(guān)性黃斑變性黃斑部循環(huán)改變與脈絡(luò)膜新生血管形成[J];國際眼科雜志;2003年04期

2 Toshiyuki Nakayama;Go Hatachi;Ayumi Yoshizaki;Kazuyuki Yamazumi;Daisuke Niino;Ichiro Sekine;;Expression and significance of Tie-1 and Tie-2 receptors, and angiopoietins-1,2 and 4 in colorectal adenocarcinoma:Immunohistochemical analysis and correlation with clinicopathological factors[J];World Journal of Gastroenterology;2005年07期

本文編號：565741