本文關(guān)鍵詞：小鼠單側(cè)耳蝸損毀后耳蝸核及下丘中GAP-43表達(dá)變化的研究

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【摘要】：背景 耳聾是指聽覺系統(tǒng)中傳音部分或(和)感音部分及其聽覺傳導(dǎo)通路中聽神經(jīng)及各級(jí)聽覺中樞發(fā)生病變所引起的不同程度的聽力下降,是耳科疾病三大癥狀之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織1996年估計(jì),聽力損失者近6億。根據(jù)我國(guó)2006年進(jìn)行的全國(guó)第2次殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示,聽力殘疾人約2004萬人,言語(yǔ)殘疾127萬人,共占各類殘疾人總數(shù)的27%,嚴(yán)重影響了人們的生活和日常工作。因此,耳聾的預(yù)防和治療仍是耳科醫(yī)師和耳科學(xué)工作者肩負(fù)的神圣使命。隨著分子生物學(xué)、聽力學(xué)、電生理學(xué)和耳顯微外科技術(shù)的迅猛發(fā)展,對(duì)大多數(shù)傳導(dǎo)性聾目前可通過手術(shù)治療提高聽力。但是對(duì)于感音神經(jīng)性聾的治療,仍是目前困擾耳科界的最大難題之一。感音神經(jīng)性聾(sensorineural deafness, SNHL)最常見的原因是外周聽覺系統(tǒng)中的耳蝸毛細(xì)胞喪失,引起毛細(xì)胞缺失的主要誘因是機(jī)械性聽覺感受器的損傷、噪聲暴露引起的內(nèi)耳變化、耳毒性藥物如氨基苷類抗生素引起的聽覺感受器的損傷、老化期間出現(xiàn)的退行性變化等。這些病理變化后聽覺中樞系統(tǒng)的改變具有某些程度的相似性,簡(jiǎn)而言之,各種原因引起的聽力損失所致的聽覺中樞的可塑性變化是相似的。正是由于這種可塑性的存在,為聽覺剝奪的患者提供了恢復(fù)聽覺功能提供了可能�，F(xiàn)在,隨著世界上老齡化人口和噪音污染日益增加,耳聾患者也逐漸增加,這迫切需要尋找一條治療耳聾的新思路,聽覺中樞的可塑性恰恰為耳科醫(yī)師及耳聾患者提供了希望,進(jìn)一步理解聽覺中樞系統(tǒng)的可塑性更具有現(xiàn)實(shí)意義。 研究發(fā)現(xiàn),聽覺剝奪早期可導(dǎo)致聽覺中樞系統(tǒng)在形態(tài)和功能上發(fā)生相應(yīng)的適應(yīng)性改變。通過研究這些改變,有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)聽覺中樞的功能。本實(shí)驗(yàn)中,建立了聽覺剝奪小鼠的動(dòng)物模型,并應(yīng)用免疫組化觀察聽覺剝奪后腦干聽覺中樞聲信號(hào)重塑相關(guān)蛋白的變化,以達(dá)到進(jìn)一步了解后天性聾對(duì)聽覺中樞影響的目的。 目的 1.通過損毀耳蝸建立后天性聾動(dòng)物模型,為聽力損失后聽覺中樞的可塑性研究提供穩(wěn)定、可靠的途徑。 2.通過研究小鼠單側(cè)耳蝸損毀后耳蝸核(cochlear nucleus, CN)和下丘(inferior colliculus, IC)中生長(zhǎng)相關(guān)蛋白.-43(growth-associated protein gap-43, GAP-43)在術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化,探討小鼠聽覺中樞在聽覺剝奪后突觸的重塑和修復(fù)過程。 材料和方法 1.建立后天性聾動(dòng)物模型。參照田永勝[1]等的“小鼠聽覺剝奪動(dòng)物模型的建立”一文中的方法建立成年小鼠聽覺剝奪動(dòng)物模型。選用2-3月齡的昆明小鼠30只,體重25-35g,健康、無外耳道和中耳感染,耳廓反應(yīng)靈敏(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均無耳毒性藥物使用及強(qiáng)噪聲暴露史。按照隨機(jī)原則將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為6組,分別為正常對(duì)照組和單側(cè)耳蝸損毀后3、7、15、30、60天組,每組各5只。單側(cè)耳蝸損毀組在大視野棱鏡式手術(shù)放大鏡下,用顯微手術(shù)器械切除鼓室后壁,辨清耳蝸位置后,損毀耳蝸。 2.HE染色觀察正常對(duì)照組和單側(cè)耳蝸損毀組耳蝸核和下丘神經(jīng)元形態(tài)的改變。 3.采用免疫組化學(xué)SP法對(duì)正常對(duì)照組和耳蝸損毀不同時(shí)間點(diǎn)耳蝸核和下丘GAP-43蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析。采用SPSS17.0分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組間差異用單因素方差分析,兩組間的比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或校正t檢驗(yàn),多組間的兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05,為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.建立了穩(wěn)定的聽覺剝奪小鼠模型。 2.耳蝸切除組術(shù)側(cè)耳蝸核和雙側(cè)下丘中部分神經(jīng)元出現(xiàn)體積萎縮,突起消失,胞漿著色淺淡,核固縮、碎裂或消失。 3.小鼠單側(cè)耳蝸損毀后3天、7天、15天,術(shù)側(cè)耳蝸核GAP-43含量水平呈上升趨勢(shì),較正常對(duì)照組及非術(shù)側(cè)表達(dá)升高(P0.05)；術(shù)后30天,GAP-43表達(dá)水平下降,但表達(dá)水平仍高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),到損毀后60天,GAP-43表達(dá)水平稍高于正常對(duì)照組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。非術(shù)側(cè)耳蝸核GAP-43含量水平與正常對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4.小鼠單側(cè)耳蝸損毀后3天,術(shù)耳同側(cè)和對(duì)側(cè)下丘GAP-43表達(dá)水平較正常對(duì)照組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),術(shù)耳同側(cè)和對(duì)側(cè)差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；術(shù)后7天、15天,表達(dá)均持續(xù)上升；術(shù)后30天、60天表達(dá)逐漸下降,但術(shù)耳同側(cè)和對(duì)側(cè)仍高于正常對(duì)照組(P0.05),除正常組及60天組外,雙耳差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.切除耳蝸可建立穩(wěn)定可靠的聽覺剝奪動(dòng)物模型。 2.單側(cè)耳蝸損毀去傳入損傷后,耳蝸核和下丘核GAP-43的表達(dá)呈現(xiàn)出顯著的動(dòng)態(tài)變化過程,可能反映了腦干聽覺中樞神經(jīng)元在聽力損失后軸突再生及突觸重塑情況。
【關(guān)鍵詞】：耳蝸損毀 聽覺剝奪 耳蝸核及下丘 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目錄11-12
• 中英文縮略詞對(duì)照12-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 附圖30-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 綜述 聽覺中樞系統(tǒng)的可塑性相關(guān)研究37-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在讀學(xué)位期間發(fā)表的論文48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：561647