本文關(guān)鍵詞：京尼平交聯(lián)羊膜的制備、體外性能及治療角膜堿燒傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 研制一種新型的脫細(xì)胞羊膜制品—京尼平交聯(lián)羊膜，觀察其生物物理性狀及在體外的細(xì)胞相容性，并且進(jìn)一步觀察其有效性，通過對(duì)兔角膜急性堿燒傷治療效果的觀察，探討其在修復(fù)眼表過程中發(fā)揮作用的機(jī)制，為該新型的生物材料的臨床應(yīng)用提供前期試驗(yàn)依據(jù)。 本研究分為三部分： 部分一：京尼平交聯(lián)羊膜的制備 部分二：京尼平交聯(lián)羊膜的體外性能研究 部分三：京尼平交聯(lián)羊膜治療兔角膜急性堿燒傷的實(shí)驗(yàn)研究 方法 部分一:經(jīng)一定程序?qū)⒀蚰び?.5%、1%的京尼平溶液進(jìn)行交聯(lián)制得京尼平交聯(lián)羊膜，在肉眼下觀察大體外觀、檢測(cè)抗縫線撕裂能力、顯微鏡下觀察細(xì)微結(jié)構(gòu)，HE染色，掃描電鏡觀察。 部分二：按照實(shí)驗(yàn)一的方法，分別隨機(jī)選取制備好的新鮮及交聯(lián)羊膜，按實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分組。每一組分別進(jìn)行檢測(cè)： 1、厚度測(cè)定：濾紙吸干待檢羊膜表面水分，用厚度儀（精度0.01mm）夾住羊膜，適當(dāng)?shù)丶訅海x出指針讀數(shù) 2、力學(xué)性能測(cè)定：在生物材料拉力測(cè)試機(jī)上對(duì)各組樣品羊膜進(jìn)行單向拉伸，樣品斷裂時(shí)，計(jì)算機(jī)自動(dòng)輸出抗拉強(qiáng)度（Mpa）、斷裂伸長(zhǎng)率（%）、彈性模量(Mpa)及應(yīng)力—應(yīng)變曲線等。 3、降解率測(cè)定：將制備好的兩種樣品羊膜在室溫下自然風(fēng)干，并剪取同樣大小的相等數(shù)量的兩種羊膜數(shù)片，在固定的時(shí)間點(diǎn)分別稱量其浸入膠原酶溶液前后的質(zhì)量M0，M1，降解率=(M0-M1/M0)%， 4、體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)：將京尼平交聯(lián)羊膜按一定面積容量比（1cm2/1ml）浸入細(xì)胞培養(yǎng)液中72h獲取京尼平羊膜的浸提液，以該浸提液代替常用細(xì)胞培養(yǎng)液，以常用細(xì)胞培養(yǎng)液組作為對(duì)照，培養(yǎng)相同密度小鼠成纖維細(xì)胞，于培養(yǎng)的2、4、7天行MTT，計(jì)算RGR 部分三：60只健康新西蘭大白兔，均無眼部病變。以右眼造堿燒傷模型（重度）后隨機(jī)分成3組，每組20只。A組：燒傷后移植G-HAM。B組：燒傷后移植AM。C組：不做任何處理，對(duì)照組，僅滴眼藥水。術(shù)后每天觀察眼表大體狀況，羊膜脫落時(shí)間。從第7天開始，每周觀察術(shù)眼角膜混濁度和新生血管并對(duì)兩者評(píng)分。同時(shí)取角膜HE染色。 結(jié)果 部分一：京尼平交聯(lián)后的羊膜肉眼下見：外觀呈淡藍(lán)色半透明膜，鑷子提起時(shí)較易成型，不易卷曲、撕裂，質(zhì)地柔韌。電鏡下可見交聯(lián)后的羊膜膠原之間的聯(lián)系更加致密，結(jié)構(gòu)未改變。 部分二：1、組織厚度測(cè)定結(jié)果顯示，京尼平交聯(lián)后的羊膜平均厚度(0.040±0.009)mm,新鮮羊膜平均厚度(0.038±0.010)mm，京尼平交聯(lián)羊膜略有增厚，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05） 2、兩組羊膜生物力學(xué)性能測(cè)定結(jié)果：京尼平交聯(lián)羊膜的最大應(yīng)力、抗拉強(qiáng)度，斷裂伸長(zhǎng)率，彈性模量與新鮮脫細(xì)胞羊膜的最大應(yīng)力、抗拉強(qiáng)度，斷裂伸長(zhǎng)率，彈性模量相比具有增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 3、第一天觀察結(jié)束時(shí)，AM已不成膜形，完全溶解，彌散在消化液中。G-HAM仍可見，外觀未發(fā)生變化，重量基本上沒有變化，降解率:Day1（4.48±0.86）%，Day3（4.96±1.39）%,Day5（9.44±2.67）%。Week（115.25±4.08）%，Week（234.93±6.07）%,Week3（50.49±4.77）%，Week4（74.62±3.81）%。 4、京尼平交聯(lián)羊膜體外細(xì)胞毒性：按照國(guó)標(biāo)GB／T16886．5—2003的規(guī)定[5]，京尼平交聯(lián)羊膜體外細(xì)胞毒性分級(jí)0～1級(jí)，無或低細(xì)胞毒性,符合生物材料要求。 部分三：每只眼均為重度堿燒傷，總共參與實(shí)驗(yàn)兔眼54只，相應(yīng)觀察結(jié)果如下： 1、京尼平交聯(lián)羊膜完全溶解脫落的時(shí)間為20.00±10.418d，而普通羊膜為9.20±10.618d，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2、術(shù)后14、28、42天,京尼平交聯(lián)羊膜組CNV評(píng)分與對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），術(shù)后14、28、42天,普通羊膜組CNV評(píng)分與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3、術(shù)后14d，京尼平交聯(lián)羊膜組與普通羊膜組角膜渾濁度評(píng)分與 對(duì)照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p10.05，p20.05）；術(shù)后28、42d，京尼平羊膜組與普通羊膜組角膜渾濁度評(píng)分與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；而G-HAM組與AM組角膜渾濁度評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 4、在1個(gè)半月的觀察期，分別有1只眼(AM組)和3只眼(control組) 發(fā)生角膜穿孔，排出實(shí)驗(yàn)。 結(jié)論 1、京尼平交聯(lián)羊膜具有良好的生物力學(xué)特性，其柔韌性和可塑性優(yōu)于單層羊膜，其在厚度沒有增加的情況下，可延長(zhǎng)在眼表的停留時(shí)間，并且沒有細(xì)胞毒性。因此，京尼平交聯(lián)羊膜是一種能克服傳統(tǒng)羊膜所存在的缺點(diǎn)的新型生物材料。 2、治療角膜化學(xué)性堿燒傷，京尼平交聯(lián)羊膜與普通新鮮羊膜相比，它在抑制新生血管以及減輕角膜混濁方面效果更顯著。后期新生成的角膜上皮也更穩(wěn)定，排列更規(guī)則。另外它發(fā)生溶解的時(shí)間明顯延長(zhǎng)，能在角膜創(chuàng)面覆蓋更久，既覆蓋了創(chuàng)面又給角膜細(xì)胞的再生提供了一個(gè)良好的生物支架，從而達(dá)到修復(fù)眼表的目的。 3、京尼平交聯(lián)羊膜具有潛在的研發(fā)應(yīng)用價(jià)值，其在眼表疾病中的應(yīng)用價(jià)值有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：京尼平 羊膜 交聯(lián) 羊膜移植 眼表疾病 組織工程
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R779.65
【目錄】：

• 符號(hào)說明5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-16
• 前言16-18
• 第一部分 京尼平交聯(lián)羊膜的制備及組織形態(tài)學(xué)觀察18-21
• 材料與方法18-19
• 結(jié)果19-20
• 討論20-21
• 第二部分 京尼平交聯(lián)羊膜的體外性能研究21-27
• 材料與方法21-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-27
• 第三部分 京尼平交聯(lián)羊膜治療兔角膜急性堿燒傷效果的實(shí)驗(yàn)研究27-37
• 材料與方法27-29
• 結(jié)果29-34
• 討論34-37
• 全文結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述 角膜塑形術(shù)及研究現(xiàn)狀41-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章51-52

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：493868