本文關鍵詞：新生血管特異性結合肽GX1抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】 糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy, DR)是最為常見的糖尿病微血管并發(fā)癥之一，為成人致盲四大原因之一，嚴重威脅人類健康，其病理改變主要以視網(wǎng)膜新生血管生成為主，且伴有滲出、出血等病變，最終導致眼結構和功能的嚴重破壞，視網(wǎng)膜脫離，甚至造成失明。因此，抑制視網(wǎng)膜新生血管生成對治療糖尿病視網(wǎng)膜病變有重要意義。傳統(tǒng)的玻璃體切除術、全視網(wǎng)膜激光光凝等療法，風險大、費用高、療效有限，治療后易復發(fā)，并有一定的視功能損害。目前，腫瘤治療領域出現(xiàn)的分子靶向治療為糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的治療提供了新思路，采用這種治療策略在提高抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管治療療效的同時，可降低藥物的毒副作用，而尋找視網(wǎng)膜新生血管特異表達的分子成為其關鍵環(huán)節(jié)。 最新研究報道，腫瘤血管所表達的某些特異性分子，如aminopetidases及整合素受體在糖尿病視網(wǎng)膜病變中也有表達，并可介導噬菌體靶向及內化入內皮細胞。靶向αⅤβ3/αⅤβ5的小肽RGD-4C可通過選擇性激活視網(wǎng)膜內皮細胞凋亡而抑制氧誘導的視網(wǎng)膜新生血管生成，說明視網(wǎng)膜新生血管與腫瘤血管有某些體內所共同表達的分子，這些分子有望成為糖尿病視網(wǎng)膜病變抗新生血管生成的新靶點。 我們利用體內噬菌體呈現(xiàn)肽技術得到的GX1，是一種與人胃癌血管內皮細胞特異性結合的環(huán)九肽CGNSNPKSC，已獲國家專利。體外實驗顯示，GX1能抑制人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）、與人胃癌細胞SGC7901共培養(yǎng)的HUVEC（Co-HUVEC）的增殖、管狀結構形成等，體內抑制雞胚尿囊膜新生血管生成，GX1與rmhTNFα的融合蛋白GX1-rmhTNFα可明顯抑制荷胃癌小鼠腫瘤組織的生長，說明GX1可能具有抗腫瘤血管生成的作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)，GX1能夠與氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管特異性結合，提示其受體可能在視網(wǎng)膜新生血管生成中發(fā)揮重要功能，是視網(wǎng)膜新生血管的特征性分子，因此有必要進一步明確GX1及其受體在視網(wǎng)膜新生血管生成中的功能，本研究就將圍繞以上問題展開。 【目的】 1.驗證GX1短肽與糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管內皮細胞的結合特異性。 2.體外實驗探討GX1對糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管內皮細胞增殖、遷移、微管形成、周期及凋亡等生物學特性的影響，為體內試驗提供依據(jù)。 3.體內實驗探討GX1對高氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管生成的干預效果，從而闡明GX1對糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的生物學功能。 【方法】 1.利用化學合成的GX1短肽、對照肽（CNKSPSGNC, Pep2）及與生物素結合的GX1（bio-GX1）、Pep2（bio-Pep2）采用免疫細胞化學及免疫細胞熒光的方法檢測大鼠視網(wǎng)膜微血管內皮細胞（rat retinal microvascularendothelial cells, rRMECs）有無GX1受體特異性表達，以鑒定GX1對糖尿病視網(wǎng)膜病變視網(wǎng)膜新生血管內皮細胞的靶向能力。 2.通過MTT實驗、管狀結構形成實驗、遷移實驗研究GX1對rRMECs增殖能力、微管形成能力、遷移能力等生物學特性的影響。 3. GX1對rRMECs作用后，經流式細胞學技術分析其細胞周期分布和凋亡情況，為GX1作用的機制研究提供參考。 4.構建高氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型，通過視網(wǎng)膜組織切片計數(shù)GX1、Pep2及PBS腹腔注射后視網(wǎng)膜突破內界膜的內皮細胞核數(shù)目及視網(wǎng)膜鋪片，，對高氧誘導視網(wǎng)膜新生血管生成的干預效果進行評價，從而闡明GX1對糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的生物學功能。 【結果】 1.免疫細胞化學染色及免疫細胞熒光檢測證實，與Pep2和PBS相比，GX1短肽可與rRMECs特異性結合，驗證了GX1對糖尿病視網(wǎng)膜病變視網(wǎng)膜新生血管的靶向結合能力。 2. MTT實驗、管狀結構形成實驗、遷移實驗結果顯示，GX1可以抑制rRMECs的增殖，且其抑制作用呈劑量依賴性；同時GX1可抑制rRMECs的微管形成、遷移能力；此外，GX1可部分抑制血管內皮細胞生長因子165（VEGF165）誘導的rRMECs的增殖、微管形成及遷移增加。 3.流式細胞學分析顯示，與Pep2相比，GX1可顯著誘導rRMECs的凋亡（凋亡率分別為5.33%和7.33%）（P0.05）；而GX1對細胞周期分布則無明顯影響。 4.成功構建了高氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型，在眼球組織切片上計數(shù)突破視網(wǎng)膜內界膜的視網(wǎng)膜新生血管內皮細胞核數(shù)可以看出，與腹腔注射Pep2組、PBS組及未注射GX1組相比，腹腔注射GX1組細胞核數(shù)明顯降低。視網(wǎng)膜鋪片中，可見腹腔注射GX1組視網(wǎng)膜新生血管的密度和異常程度明顯輕于腹腔注射Pep2組、PBS組及未注射GX1組。正常對照組未見明顯異常。 【結論】 1.GX1短肽具有糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管靶向性，并能抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管內皮細胞的增殖、微管形成及遷移，以及誘導其凋亡，在體外發(fā)揮抗糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的作用。 2.GX1可抑制高氧誘導小鼠視網(wǎng)膜新生血管模型中的視網(wǎng)膜新生血管形成，從而為臨床上治療糖尿病視網(wǎng)膜病變視網(wǎng)膜新生血管生成提供新的思路。
【關鍵詞】：糖尿病視網(wǎng)膜病變 血管生成 血管靶向 噬菌體展示肽
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 縮略語表6-9
• 中文摘要9-13
• Abstract13-18
• 前言18-20
• 文獻回顧20-30
• 1 血管生成與糖尿病視網(wǎng)膜病變20-25
• 1.1 血管生成20-21
• 1.2 視網(wǎng)膜新生血管的生成21
• 1.3 糖尿病視網(wǎng)膜病變的病理改變21-22
• 1.4 糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的機制22-24
• 1.5 糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治進展24-25
• 2 糖尿病視網(wǎng)膜病變與血管抑制分子靶向治療25-26
• 2.1 分子靶向治療25
• 2.2 血管抑制分子靶向治療25
• 2.3 糖尿病視網(wǎng)膜病變血管抑制分子靶向治療25-26
• 3 GX1 的背景26-28
• 3.1 GX1 的體內篩選26
• 3.2 GX1 胃癌血管內皮結合靶向性的鑒定26-27
• 3.3 GX1 抗腫瘤作用的研究27-28
• 3.4 GX1 受體的篩選28
• 4 GX1 受體在氧誘導視網(wǎng)膜新生血管上的表達28-30
• 實驗一 GX1 短肽對大鼠視網(wǎng)膜微血管內皮細胞靶向性的鑒定30-39
• 1 材料30-31
• 2 方法31-34
• 3 結果34-37
• 4 討論37-39
• 實驗二 GX1 對體外培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管內皮細胞血管生成功能的影響39-51
• 1 材料39
• 2 方法39-42
• 3 結果42-48
• 4 討論48-51
• 實驗三 GX1 短肽抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管生成51-59
• 1 材料51
• 2 方法51-53
• 3 結果53-56
• 4 討論56-59
• 小結59-60
• 參考文獻60-69
• 個人簡歷和研究成果69-70
• 致謝70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉X;許迅;;糖尿病性視網(wǎng)膜病變眼科治療的新進展[J];上海醫(yī)學;2009年05期

2 韓宇;洪流;吳開春;曹姍姍;賀莉;樊代明;;環(huán)行七肽CGNSNPKSC的受體鑒定及其在胃癌中的表達[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2007年04期

3 賀莉;吳開春;惠曉莉;陳瑜;梁樹輝;陳蓓;曹姍姍;閆X;韓宇;姚芳芳;楊利萍;韓英;樊代明;;應用免疫沉淀-質譜法篩選腫瘤血管靶向肽CGNSNPKSC的結合受體[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2008年08期

  本文關鍵詞：新生血管特異性結合肽GX1抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變新生血管生成的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：455717