目的研究葫蘆素B對人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)細(xì)胞凋亡的影響及作用機制。方法將體外培養(yǎng)的RB細(xì)胞分為對照組、低、中、高濃度葫蘆素B組,MTT法測定細(xì)胞增殖率,Hoechst 33342/PI雙染觀察細(xì)胞凋亡,Annexin V/PI檢測凋亡,鏡觀察細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)改變,蛋白質(zhì)印跡法檢測Bax及Bcl-2蛋白相對表達(dá)量。結(jié)果葫蘆素B劑量依賴性的抑制了RB細(xì)胞生長并誘導(dǎo)凋亡;葫蘆素B干預(yù)后RB細(xì)胞胞漿濃縮,細(xì)胞器結(jié)構(gòu)破壞,細(xì)胞核染色質(zhì)凝結(jié)成塊并固縮;蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示,Bax蛋白表達(dá)增加,Bcl-2蛋白表達(dá)下降。結(jié)論葫蘆素B通過改變線粒體凋亡途徑中凋亡相關(guān)信號分子的表達(dá),促進RB細(xì)胞凋亡。

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【部分圖文】：

圖1 葫蘆素B對RB細(xì)胞增殖率的影響 (**示P<0.01)

MTT結(jié)果顯示,對照組細(xì)胞增殖率為96.33%,不同濃度葫蘆素B干預(yù)RB細(xì)胞48h后,其OD值均明顯降低(P<0.01,圖1),RB細(xì)胞增殖率逐漸下降。二、葫蘆素B促進RB細(xì)胞凋亡及壞死

圖2 葫蘆素B對RB細(xì)胞凋亡及壞死的影響

Hoechst33342染液能夠穿透正常細(xì)胞的細(xì)胞膜,染色后呈彌散的低藍(lán)光,對于凋亡細(xì)胞,Hoechst33342染液后呈亮藍(lán)色;PI不能穿透正常細(xì)胞的胞膜,但可以穿透壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜,熒光顯微鏡檢測時,被PI染液染色的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色熒光。我們的觀察結(jié)果顯示,伴隨葫蘆素B濃度增加,....

圖3 葫蘆素B對RB細(xì)胞凋亡率的影響 (**示P<0.01)

為了進一步檢測葫蘆素B促進RB細(xì)胞凋亡率的影響,我們采用流式細(xì)胞技術(shù)方法測定了不同組別的細(xì)胞凋亡率,實驗中使用的為AnnexinV-FITC/PI雙染色檢測試劑盒。結(jié)果顯示,對照組RB細(xì)胞凋亡率為(2.57±1.43)%,隨著葫蘆素B作用濃度的遞增,RB細(xì)胞凋亡率也呈劑量依賴性....

圖4 葫蘆素B對RB細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)影響的電鏡觀察

對照組RB細(xì)胞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰易辨。葫蘆素B干預(yù)后RB細(xì)胞胞漿濃縮,細(xì)胞核染色質(zhì)凝結(jié)聚集在核膜周邊,呈新月狀或環(huán)狀小體改變,葫蘆素B高濃度組細(xì)胞漿腫脹明顯,可以觀察到空泡結(jié)構(gòu),部分細(xì)胞細(xì)胞膜不完整,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合形成空泡(圖4)。五、葫蘆素B促進線粒體凋亡信號通路

本文編號：4047037