目的:由于COL11A1和COL18A1基因的致病突變通常會(huì)導(dǎo)致包含有高度近視癥狀的綜合征,所以本論文擬研究COL11A1和COL18A1基因上的5個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位點(diǎn)(rs17127311,rs11911327,rs2236454,rs2236457,rs2236475)與中國(guó)漢族人群高度近視易感性之間的關(guān)系。而SNTB1基因作為近視易感基因,對(duì)其相關(guān)的研究和報(bào)道均比較少,所以本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)行近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究,以便為高度近視的有效防治提供理論依據(jù)和可能的干預(yù)靶點(diǎn)。研究方法:對(duì)于COL11A1和COL18A1基因的研究,本實(shí)驗(yàn)收集869例高度近視患者和804名正常者(均為中國(guó)漢族人群)的外周血標(biāo)本,并提取相應(yīng)的標(biāo)本DNA。根據(jù)5個(gè)SNP位點(diǎn)相應(yīng)序列設(shè)計(jì)上、下游引物和Snapshot引物,DNA擴(kuò)增方法采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)擴(kuò)增進(jìn)行,同時(shí)采用ABI-Snapshot技術(shù)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步延伸,然后置于DNA測(cè)序儀上檢測(cè)其基因型。對(duì)檢測(cè)的結(jié)果...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 近視概論
    1.2 高度近視的分子遺傳學(xué)研究
        1.2.1 連鎖分析
        1.2.2 關(guān)聯(lián)分析
    1.3 高度近視疾病基因國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.4 近視的遺傳因素和環(huán)境因素
    1.5 單核苷酸多態(tài)性簡(jiǎn)介
        1.5.1 單核苷酸多態(tài)性概念
        1.5.2 常見的的SNPs分析方法
        1.5.3 遺傳標(biāo)記的演化
    1.6 COL1A1和COL18A1基因以及SNTB1基因的前期研究
        1.6.1 COL1A1和COL18A1基因在近視中的前期研究
        1.6.2 SNTB1基因在近視中的前期研究
    1.7 本論文的主要內(nèi)容
        1.7.1 COL11A1和COL18A1基因多態(tài)位點(diǎn)與近視相關(guān)性分析
        1.7.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究
    1.8 以期完成的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>    1.9 本實(shí)驗(yàn)的結(jié)構(gòu)安排
第二章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和主要生物材料
        2.2.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究的主要生物材料
    2.3 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析的實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象的眼科檢查
        2.3.2 全血DNA樣本提取
        2.3.3 SNP位點(diǎn)的篩選和引物設(shè)計(jì)
        2.3.4 基因分型
        2.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    2.4 SNTB1基因功能研究中質(zhì)粒的擴(kuò)增
        2.4.1 大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備與轉(zhuǎn)化
        2.4.2 質(zhì)粒提取
    2.5 SNTB1基因功能研究中293T細(xì)胞和3T3細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.6 CCK8法分析SNTB1基因?qū)?T3細(xì)胞和293T細(xì)胞增殖的影響
        2.6.1 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.6.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    2.7 SNTB1基因功能研究中細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.7.1 實(shí)驗(yàn)用鼠尾膠原制備
        2.7.2 Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移
    2.8 SNTB1基因功能研究中細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.8.1 Matrigel檢測(cè)細(xì)胞粘附
第三章 結(jié)果
    3.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1.1 研究對(duì)象臨床資料
        3.1.2 GeneticAnalyzer軟件基因分型結(jié)果
        3.1.3 Sanger直接測(cè)序法驗(yàn)證基因分型
        3.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.1.5 連鎖不平衡和單體型分析
    3.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 CCK8法分析SNTB1基因?qū)?xì)胞增殖的影響
        3.2.2 SNTB1基因?qū)?T3細(xì)胞和293T細(xì)胞遷移粘附的影響
第四章 討論
    4.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        4.1.1 COL11A1和COL18A1基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果分析
        4.1.2 易感基因分析
    4.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        4.2.1 SNTB1基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果分析
        4.2.2 SNTB1基因編碼的蛋白相關(guān)功能分析
第五章 全文總結(jié)與展望
    5.1 本研究結(jié)果總結(jié)
        5.1.1 COL11A1和COL18A1基因與近視相關(guān)性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)
        5.1.2 近視易感基因SNTB1的相關(guān)功能研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)
    5.2 下一步工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果



本文編號(hào)：4042143