本文關鍵詞：MicroRNA24對碘酸鈉造成的視網膜損傷的保護作用的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：視網膜疾病是一類嚴重影響人類視力及生活質量的疾病。視網膜的損傷尤其是視網膜上皮層的損傷，至今臨床上尚無發(fā)現(xiàn)可靠有效的治療方法。隨著醫(yī)學發(fā)展，采用藥物、手術、激光等雖可控制病情，但無法從根本上治療基因缺陷。而基因治療越來越受到關注。隨著對microRNAs家族研究的深入，microRNA24的基因功能引起研究熱潮。目前國內就microRNA24對眼科疾病尤其是視網膜損傷的作用機制的研究尚不多見。 目的：將包裝好的慢病毒載體分別用于細胞實驗和動物實驗，分別檢測在體外和體內碘酸鈉刺激的情況下，microRNA24的表達對碘酸鈉造成的ARPE-19的損傷是否具有保護作用。 方法：（1）根據(jù)目的基因構建慢病毒載體，然后進行慢病毒包裝、收獲及濃縮，并且進行滴度的測定。（2）細胞實驗：分別用0.3mg/ml,0.6mg/ml,1.2mg/ml,2.4mg/ml,4.8mg/ml,9.6mg/ml濃度的碘酸鈉刺激視網膜上的不同細胞（ARPE-19,Muller,RGC-5），比較視網膜上各種細胞對碘酸鈉的敏感性，為動物模型的建立提供依據(jù)。分別加入5μl，10μl，15μl的包裝好的病毒，讓其感染ARPE-19細胞，比較不同劑量感染后的ARPE-19細胞與單純ARPE-19對碘酸鈉刺激的敏感性是否有改變。（3）動物實驗：取160g左右的SD大鼠20只，分為2組，裂隙燈及眼底鏡檢查排除角膜疾病，白內障及眼底疾病，ERG檢查排除左右眼a波及b波振幅有差異者。第一組先按50mg/kg的劑量尾靜脈注射碘酸鈉溶液，2天后進行視網膜下腔病毒注射，統(tǒng)一規(guī)定右眼注射病毒5μl，左眼注射同等體積的滅菌的PBS溶液。第二組預先1周注射病毒，按照第一組的注射標準與方式，1周后再進行尾靜脈注射碘酸鈉溶液。兩組分別于注射完成后1周，2周，4周，6周進行ERG檢查，統(tǒng)計a波及b波振幅，看有無統(tǒng)計學差異。 結果：（1）成功構建了慢病毒載體，并且測試病毒滴度為2E+7TU/μl。（2）細胞實驗：經不同濃度碘酸鈉作用48h后，三種細胞（ARPE-19,Muller,RGC-5）IC50分別為（2.26±0.12）、(2.34±0.76)、(2.13±0.69)mg/ml。說明三種細胞對碘酸鈉的敏感性依次為RGC-5ARPEMuller。對于每種細胞，隨著碘酸鈉濃度的升高，其存活率降低。分別收集24h,48h,72h病毒感染的ARPE-19細胞，不同劑量病毒感染后的細胞(ARPE-19+5μl，ARPE-19+10μl，ARPE+15μl)的IC50分別為（2.49±0.32）、（3.62±0.42）、（4.83±0.51）mg/ml。說明不同劑量病毒感染后ARPE-19的50%碘酸鈉抑制度濃度均較單純ARPE-19細胞明顯升高（P0.05，=0.05），而（ARPE+15μl）組相對單純ARPE-19組升高更顯著（P0.05，=0.05）。即在相同濃度的碘酸鈉刺激下，（ARPE+15μl）組細胞存活率最高。這初步說明microRNA24對ARPE-19細胞是有保護作用的。而且這種保護作用在高劑量病毒組效果更顯著。（3）動物實驗：兩組在1w，2w，4w周后做ERG檢查，五個強度下左右兩眼a波及b波均無振幅，對比無統(tǒng)計學差異（P0.05）。在第6周做ERG檢查，五個強度下兩組均a波及b波均有振幅，但比較兩組在五個強度下的a波及b波振幅并無統(tǒng)計學差異（P0.05）。 結論：大鼠尾靜脈注射碘酸鈉可選擇性破壞視網膜色素上皮細胞，成功建立視網膜損傷的動物模型；病毒感染的ARPE-19細胞對碘酸鈉刺激有抵抗作用，細胞存活率增高，說明microRNA24對碘酸鈉造成的視網膜損傷有保護作用，并且與病毒劑量成正相關；視網膜下腔注射病毒后第六周ERG檢查a波及b波振幅同樣驗證了microRNA24對視網膜損傷的保護作用，但是否有預先保護作用在本實驗中尚未驗證。
【關鍵詞】：microRNA24 碘酸鈉 ARPE-19
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 慢病毒包裝和滴度檢測11-19
• 1 材料11-13
• 2 方法13-15
• 3 結果15-17
• 4 討論17-19
• 第二部分 體外實驗研究19-34
• 1 材料19-21
• 2 方法21-24
• 3 結果24-32
• 4 討論32-34
• 第三部分 體內實驗研究34-40
• 1 材料34-35
• 2 方法35-37
• 3 結果37-38
• 4 討論38-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述：MICRORNA24 功能的研究新進展44-54
• 參考文獻49-54
• 中英文對照縮略詞表54-55
• 攻讀學位期間科研成績55-56
• 致謝56-57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王瑩;宋響文;;miRNAs在不同物種進化中序列保守性的研究[J];遼寧師范大學學報(自然科學版);2009年03期

2 王瑩;龍亮華;;豌豆中抗寒相關性miRNAs功能特異性驗證及其克隆的研究[J];遼寧師范大學學報(自然科學版);2010年02期

  本文關鍵詞：MicroRNA24對碘酸鈉造成的視網膜損傷的保護作用的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：379938