發(fā)布時(shí)間：2022-09-30 17:54

　　目的觀察以25kDa線性聚乙稀亞胺（linear plyethylenimine,L-PEI）和分枝PEI（branched PEI,B-PEI）作為表達(dá)綠色熒光蛋白的質(zhì)粒pEGFP-C1的載體,轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)新生C57BL/6J小鼠基底膜的效果。方法25kDa線性或分枝PEI與質(zhì)粒在5%葡萄糖溶液或PBS溶液中形成納米粒子后,行透射電鏡觀察納米粒子表征;按相同方法制備納米粒子,行凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)并在培養(yǎng)的293T細(xì)胞中行MTT毒性測試,選擇毒性較小的PEI類型作為質(zhì)粒載體在293T細(xì)胞檢測其轉(zhuǎn)染效果;以最適條件用其轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)新生C57BL/6J小鼠耳蝸基底膜并行熒光鏡觀察。結(jié)果在相同條件下,B-PEI轉(zhuǎn)染能力略強(qiáng)于L-PEI,但L-PEI毒性明顯低于B-PEI;在PBS中制備的L-PEI-pDNA納米粒子的毒性小于在葡萄糖溶液中制備的該粒子毒性;L-PEI-pDNA納米粒子在適宜濃度范圍可以轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)新生小鼠耳蝸基底膜的螺旋緣纖維細(xì)胞、螺旋神經(jīng)元、支持細(xì)胞,但轉(zhuǎn)染效率不高。結(jié)論 L-PEI可作為轉(zhuǎn)染新生小鼠耳蝸基底膜細(xì)胞的非病毒載體,但需要進(jìn)一步優(yōu)化獲得更好的轉(zhuǎn)染效果。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2主要材料
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1納米粒子的制備及透射電鏡觀察
        1.3.2凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)
        1.3.3 MTT毒性實(shí)驗(yàn)
        1.3.4 pEGFP-C1-L-PEI納米粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
        1.3.5納米粒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的小鼠基底膜
        1.3.6轉(zhuǎn)染后小鼠耳蝸基底膜免疫熒光染色
        1.3.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 pEGFP-C1-PEI納米粒子的透射電鏡觀察結(jié)果
    2.2凝膠阻滯結(jié)果
    2.3 MTT毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 pEGFP-C1-L-PEI納米粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞熒光觀察及流式分析
    2.5 pEGFP-C1-L-PEI納米粒子轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的小鼠基底膜熒光觀察
    2.6轉(zhuǎn)染后小鼠耳蝸基底膜組織不同部位免疫熒光染色結(jié)果
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠耳蝸器官培養(yǎng)及其組織學(xué)檢查技術(shù)[J]. 付勇,丁大連,Richard Salvi.  中國耳鼻咽喉頭頸外科. 2009(11)



本文編號：3684003