本文關(guān)鍵詞：米諾環(huán)素對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：視神經(jīng)損傷，臨床療效差，其再生和功能恢復(fù)一直是眼科臨床及科研亟待解決的難題。目前研究主要集中在其損傷后早期藥物運(yùn)用，盡管抗氧化劑、神經(jīng)節(jié)苷脂等對(duì)恢復(fù)視功能有一定作用，但藥物副作用、療效欠佳等因素限制了其廣泛應(yīng)用。使得關(guān)于視神經(jīng)損傷保護(hù)的研究進(jìn)展緩慢。米諾環(huán)素（minocycline）為第二代半合成四環(huán)素衍生物，現(xiàn)在以較強(qiáng)的抗菌作用廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)多項(xiàng)研究顯示，，米諾環(huán)素除具有抗炎、免疫抑制作用外，在多種神經(jīng)疾病模型中顯示出一定神經(jīng)元保護(hù)作用[1]。但米諾環(huán)素對(duì)視神經(jīng)損傷再生的作用尚不清楚，相關(guān)研究報(bào)道罕見(jiàn)。 本研究通過(guò)建立大鼠視神經(jīng)損傷模型，應(yīng)用米諾環(huán)素進(jìn)行干預(yù)，觀察米諾環(huán)素對(duì)視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（retinal ganglion cells，RGCs）的保護(hù)作用及對(duì)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞（表面標(biāo)記物為CD11b）、腫瘤壞死因子（TNF-α）表達(dá)的影響，探討米諾環(huán)素對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷再生的作用及可能存在的保護(hù)機(jī)制，以求在促進(jìn)視神經(jīng)損傷后再生方面尋找新的治療藥物，拓寬米諾環(huán)素在臨床的應(yīng)用。為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：雄性清潔級(jí)SD大鼠60只，體重（200±20）g，行外眼、眼底檢查無(wú)病變者納入實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為正常對(duì)照組（正常組）12只（24眼）、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（對(duì)照組）24只（24眼）、實(shí)驗(yàn)治療組（治療組）24只（24眼）。后兩組建立視神經(jīng)損傷模型，從造模后1小時(shí)開(kāi)始，每日一次，對(duì)照組給予生理鹽水45mg/kg腹腔注射，治療組給予米諾環(huán)素45mg/kg腹腔注射。在傷后1天、4天、7天、14天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取材，正常組3只大鼠雙眼眼球、后兩組6只大鼠右眼眼球摘除，取視網(wǎng)膜組織固定切片，以視盤(pán)上方2mm的視網(wǎng)膜作為觀察對(duì)象。HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)計(jì)數(shù)RGCs存活數(shù)量，免疫組化染色觀察CD11b及TNF-α的表達(dá)情況，計(jì)算機(jī)圖像分析行半定量檢測(cè)平均光密度值（average optical density，AOD），以免疫陽(yáng)性染色的AOD表示抗原表達(dá)量，AOD值越高陽(yáng)性表達(dá)越強(qiáng)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS13.0軟件包，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同一組內(nèi)的不同時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)運(yùn)用單因素方差分析（ANOVA），不同組間的同一時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)運(yùn)用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1視網(wǎng)膜組織HE染色、光鏡結(jié)果 1.1形態(tài)學(xué)改變 正常組：視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)各細(xì)胞層、內(nèi)核層及外核層的細(xì)胞排列致密，結(jié)構(gòu)清晰，邊界清楚；對(duì)照組：各時(shí)間點(diǎn)RGCs數(shù)目迅速的減少，在損傷早期，部分細(xì)胞可出現(xiàn)水腫及空泡樣變化，隨著損傷時(shí)間延長(zhǎng)，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的胞核明顯變稀疏、變薄且排列紊亂，內(nèi)核層和外核層也不同程度的減少；治療組亦可見(jiàn)上述改變，但其各時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照組的各時(shí)間點(diǎn)損傷輕，各時(shí)間點(diǎn)大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞核排列可，尚整齊，稀疏程度及空泡樣改變均較對(duì)照組輕。 1.2RGCs數(shù)量改變 正常組平均RGCs數(shù)無(wú)明顯差異；對(duì)照組1、4、7、14天平均RGCs數(shù)為22.543±1.559、13.971±1.150、9.971±1.175、5.800±1.106個(gè)；治療組1、4、7、14天平均RGCs數(shù)為24.771±1.262、15.886±1.388、12.829±1.339、7.714±1.296個(gè)（每×400倍光鏡視野）。由此可見(jiàn)，視神經(jīng)損傷后對(duì)照組、治療組RGCs數(shù)目均呈下降趨勢(shì)，但治療組RGCs數(shù)均高于對(duì)照組RGCs數(shù)，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2視網(wǎng)膜CD11b和TNF-α免疫組化染色，半定量檢測(cè)： 2.1CD11b在視網(wǎng)膜中的表達(dá) 正常組小膠質(zhì)細(xì)胞呈棕黃色淡染、胞體小、分枝狀，對(duì)照組和治療組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加，突起變短、變粗，聚集在凋亡的節(jié)細(xì)胞及細(xì)胞碎片周圍。正常組AOD值無(wú)明顯差異；對(duì)照組1、4、7、14天AOD值分別為：0.291±0.013、0.482±0.027、0.217±0.008、0.146±0.012；治療組分別為：0.236±0.007、0.428±0.021、0.184±0.008、0.074±0.012；據(jù)上所示：對(duì)照組1天時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)顯著增加，4天達(dá)峰值，之后激活程度逐步下降，治療組各時(shí)間點(diǎn)小膠質(zhì)細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)也增多，但均低于對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)（P0.05）；同時(shí)，治療組、對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)均高于正常組（P0.05）。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.2TNF-α在視網(wǎng)膜中的表達(dá) 正常組SD大鼠未檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá)的TNF-α，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組TNF-α在1天時(shí)就有顯著陽(yáng)性表達(dá)，4天達(dá)高峰，14天仍有較弱的表達(dá)，呈棕黃色染色，主要表達(dá)在視網(wǎng)膜的內(nèi)、外叢狀層和外核層的胞漿中。各時(shí)間點(diǎn)AOD值：對(duì)照組分別為0.505±0.134、0.758±0.144、0.360±0.029、0.196±0.093；治療組分別為：0.393±0.081、0.632±0.125、0.247±0.039、0.078±0.016；據(jù)上所示：治療組和對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)均高于正常組（P0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4天時(shí)治療組低于對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)（P0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1、7、14天時(shí)治療組也均低于對(duì)照組陽(yáng)性表達(dá)（P0.01），差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1視神經(jīng)損傷后RGCs排列紊亂，數(shù)量減少。米諾環(huán)素可以減少RGCs的丟失，減輕其損傷，說(shuō)明米諾環(huán)素對(duì)視神經(jīng)損傷后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。 2視神經(jīng)損傷后，小膠質(zhì)細(xì)胞活化，可表達(dá)TNF-α。 3正常情況下，小膠質(zhì)細(xì)胞具有組織保護(hù)作用，視神經(jīng)損傷后，小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)RGCs具有毒害作用。 4視神經(jīng)損傷后，治療組各時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織中小膠質(zhì)細(xì)胞、TNF-α的表達(dá)較對(duì)照組均減少，較正常組均增加，說(shuō)明小膠質(zhì)細(xì)胞、TNF-α參與了視神經(jīng)損傷與修復(fù)的過(guò)程。 5CD11b及TNF-α的AOD表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），表明米諾環(huán)素可能是通過(guò)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，減少TNF-α的表達(dá)，降低炎性反應(yīng)，從而減輕視神經(jīng)損傷。
【關(guān)鍵詞】：米諾環(huán)素 視神經(jīng)損傷 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞 CD11b TNF-α
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-18
• 附圖18-27
• 附表27-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 綜述 米諾環(huán)素與視神經(jīng)視網(wǎng)膜疾病的研究進(jìn)展37-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 嚴(yán)肖嘯;趙平;;視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞與青光眼[J];國(guó)際眼科雜志;2009年10期

2 喬鋒;劉永霞;劉金華;蔣力平;成云翠;;銀杏葉提取物對(duì)兔視神經(jīng)夾傷后視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用[J];國(guó)際眼科雜志;2010年04期

3 張靜;李平華;;米諾環(huán)素對(duì)急性視神經(jīng)炎視神經(jīng)軸突及Caspase-3表達(dá)的影響[J];國(guó)際眼科雜志;2011年08期

4 王愛(ài)玲,吳玲玲;視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞與眼科疾病[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(眼科學(xué)分冊(cè));2004年06期

5 錢(qián)鈺;周建平;高鵬;徐晨;;腫瘤壞死因子抑制劑的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2012年02期

6 吳香麗;卞小蕓;韓曉芳;;視神經(jīng)損傷后促再生因素的研究進(jìn)展[J];河北醫(yī)藥;2009年21期

7 余海;李立;何俐瑩;;丙泊酚對(duì)兔晶狀體氧化損傷的保護(hù)作用探討[J];激光雜志;2009年02期

8 熊海波;;米諾環(huán)素對(duì)大鼠慢性高眼壓視網(wǎng)膜神經(jīng)保護(hù)作用探討[J];激光雜志;2011年04期

9 薛e

本文編號(hào)：363945